重组丙酮酸磷酸双激酶与荧光素酶偶联催化ATP-AMP循环反应  

An Enzymatic Cycling Reaction for ATP and AMP with Concomitant Use of Firefly Luciferase and Recombinant Pyruvate Phosphate Dikinase

作　　者：邹秉杰[1,2] 陈颖[1] 马寅姣[1] 周国华[2,3] 

机构地区：[1]中国药科大学生命科学与技术学院,南京210009 [2]华东医学生物技术研究所,南京210002 [3]南京大学医学院,南京210093

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》2008年第11期1081-1084,共4页Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology

基　　金：国家自然科学基金资助(No.30470454);日本日立中央研究所资助~~

摘　　要：丙酮酸磷酸双激酶(pyruvate phosphate dikinase,PPDK;EC 2.7.9.1)能够可逆催化磷酸烯醇式丙酮酸(phosphoenolpyruvate,PEP)、单磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)和焦磷酸盐(pyrophosphate,PPi)生成三磷酸腺苷(adenosinetriphosphate,ATP)、无机磷酸盐(orthophosphate,Pi)和丙酮酸(pyruvate).以热玫瑰小双孢菌基因组DNA为模板,PCR扩增得到了编码PPDK的基因,将此基因片段插入表达载体pET24a(+),在大肠杆菌中表达C端融合His-Tag的重组PPDK.与我们先前表达的N端融合His-Tag的PPDK相比,酶的活性提高了20倍,提示该酶的N端对活性十分重要.重组PPDK单体分子量为98 kD.经过镍亲和层析和超滤后,重组PPDK基本达到电泳纯.重组PPDK与荧光素酶偶联能够形成1个ATP-AMP循环反应,在该循环反应中,荧光素酶催化ATP生成的AMP和PPi能够被PPDK重新转化成ATP,产生一个持续稳定的信号.

关 键 词：丙酮酸磷酸双激酶 热玫瑰小双孢菌 ATP-AMP循环 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学] Q55