金黄色葡萄球菌核酸酶基因缺失突变株RN4220 Δnuc1的构建  

Construction of Staphylococcal Nuclease Mutant—S.aureus RN4220Δnuc1

作　　者：唐俊妮[1,2,3] 周锐[2] 史贤明[1] 康名松[2] 陈焕春[2] 

机构地区：[1]上海交通大学农业与生物学院食品科学与工程系陆伯勋食品安全研究中心,上海200240 [2]华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室,武汉430070 [3]四川大学生命科学学院、四川大学动物疾病防控生物工程研究中心,成都610065

出　　处：《中国生物工程杂志》2008年第11期43-47,共5页China Biotechnology

基　　金：“十一五”国家科技支撑计划“食品安全关键技术”重大项目(2006BAK02A14);上海市重大专项(07dz19508);上海市科委平台建设项目(06dz22208)资助项目

摘　　要：金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一个编码基因nuc1,为了进一步研究nuc2基因的功能,首先要将金黄色葡萄球菌nuc1基因缺失。研究目的就是通过构建同源重组质粒pBT2Δnuc1,将其电转入金黄色葡萄球菌菌株RN4220中,获得nuc1基因缺失突变株。经过了7轮培养和筛选,同源重组几率为2%(7/345),筛选出的nuc1突变株用PCR方法和RT-PCR进行了验证,从而获得了nuc1基因缺失突变株RN4220Δnuc1。Two ORFs in Staphylococcus aureus genomes were predicted to encode nucleases. One is encoded the nuclease A （SNase） without a gene name （termed nuc1） ; the other is encoded a thermonuclease （TNase） with a name of nuc （termed nuc2 ）. To further investigate the function of nuc2 in S. aureus, the resulting plasmid, pBT2 △nucl was successfully constructed. The recombinant plasmid pBT2 △nucl was introduced into S. aureus RN4220 by electroporation. Using the resistant marker for seven passages of culture, the recombination rate was about 2% （7/345）. A nucl-deleted mutant of S. aureus strain RN4220 （termed RN4220△nucl ） was successfully constructed and conformed by PCR and RT-PCR.

关 键 词：金黄色葡萄球菌 nucl nuc2 同源重组 突变株构建 

分 类 号：Q789[生物学—分子生物学]