胸膜肺炎放线杆菌荧光抗体检测方法的建立  

Development of species-specific immunofluorescence assay to detect Actinobacillus pleuopneumoniae

在线阅读下载全文

作  者:王贵平[1,2] 刘军发[1] 陈剑锋[1] 何启盖[1] 刘正飞[1] 陈焕春[1] 吴斌[1] 周锐[1] 

机构地区:[1]华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070 [2]湖南农业大学动物医学学院,湖南长沙410128

出  处:《中国预防兽医学报》2008年第12期949-953,共5页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基  金:国家自然科学基金(30200011);湖北省科技攻关计划(2006AA202A05);国家生猪现代产业技术体系项目;湖北省2001年重点科技攻关(2001AA201B02)

摘  要:将表达的胸膜肺炎放线杆菌(APP)外膜脂蛋白(OmlA)纯化后免疫新西兰白兔,收集高免血清作为一抗,建立了间接荧光抗体检测方法(IFA)。同时用提纯IgG标记FITC,作为荧光抗体,建立了直接荧光抗体检测方法(FA)。这2种检测方法对血清1型~12型APP标准株检测结果均为阳性,而血清13型和15型APP标准株、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血性波氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌和链球菌等其它相关细菌的检测结果均为阴性。IFA和FA对APP的最小检出浓度分别为5.32×104CFU/mL和4.17×105CFU/mL。IFA和FA对人工感染动物和139份临床送检病料进行检测,并与细菌学检测结果和apxIV-PCR进行比较。其中,上述4种方法检测实验感染动物样品结果均为阳性,有较好的符合率;临床可疑病料中,有36份(25.90%)为IFA阳性,29份(20.86%)为FA阳性,42份(30.22%)为PCR阳性,从7份(5.03%)病料中分离到本病原。这些初步研究结果表明,所建立的荧光抗体检测方法可以应用于APP感染的检测,在检出率方面优于细菌分离鉴定方法。An indirect fluorescent assay (IFA) and a direct fluorescent assay (FA) were developed using antibodies against OmlA protein of Actinobacillus pleuopneumoniae (APP). The assay had a detection limit of 4.17 × 10^5 colony forming units (CFU) per ml with FA and 5.32 × 10^4 CFU/mL with IFA. Both assays detected specific fluorescence in reference strains from serotype 1 to 12 (Biovar I), while no fluorescence appeared in serotype 13 (Biovar II), and serotype 15 of biovar I, as well as Haemophilus parasuis (Hps), Bordetella bronchiseptica (Bb), Pasterella multicida, E.coli, Salmonella, S.aureus, S.suis. The assays were tested against 139 clinically suspected samples, of which 36, 29 and 10 samples were detected positive by IFA, FA and apx Ⅳ-PCR, respectively. APP could be isolated from the 7 positive samples. The results supported the potential application of OmlA based fluorescent assays in diagnosis of APP infection.

关 键 词:胸膜肺炎放线杆菌 外膜脂蛋白 荧光抗体 

分 类 号:S852.619[农业科学—基础兽医学]

 

参考文献:

正在载入数据...

 

二级参考文献:

正在载入数据...

 

耦合文献:

正在载入数据...

 

引证文献:

正在载入数据...

 

二级引证文献:

正在载入数据...

 

同被引文献:

正在载入数据...

 

相关期刊文献:

正在载入数据...

相关的主题
相关的作者对象
相关的机构对象