神经生长因子的提取及其对MGC-803细胞的凋亡作用  

作　　者：韦敏[1] 宋慧[2] 班建东[3] 蒙怡[3] 石庆秋[3] 徐阳曦[3] 陈缨[3] 张学荣[3] 

机构地区：[1]广西玉林市卫生学校 [2]广西医科大学化学教研室 [3]广西医科大学蛇毒研究所,南宁530021

出　　处：《广西医科大学学报》2008年第4期526-529,共4页Journal of Guangxi Medical University

基　　金：广西科技厅资助项目(No.桂科自98110396;桂科能0630006-5E4Z)

摘　　要：目的:从广西眼镜蛇蛇毒中提取神经生长因子(nerve growth factor,NGF)并探讨其对人胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用。方法:①粗毒采用Sephadex G75凝胶过滤及CM Sepharose CL-6B阳离子交换柱进行分离纯化,洗脱峰用大鼠嗜铬神经瘤细胞(PC12细胞)测定活性,通过SDS-PAGE测定纯度和相对分子质量;②采用MTT法,以NGF浓度分别为7.5、15、30、60、120mg/L处理人胃癌MGC-803细胞24h,观察不同浓度NGF对MGC-803细胞的毒性和生长抑制率;③采用AO/EB双重染色法,NGF浓度分别为25、50、75mg/L,观察不同浓度NGF作用后细胞染色及形态的变化,计算细胞凋亡率;④An-nexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果:①所得NGF为单一组分,SDS-PAGE结果为一条带,相对分子质量约为23000,对PC12细胞有良好的促进分化作用;②NGF对MGC-803细胞的生长有抑制作用且呈剂量依赖关系,作用24h的IC50值为49.9mg/L;荧光显微镜下可观察到凋亡细胞主要特点为:细胞体积缩小,染色质固缩,橘红色荧光增强,各浓度组与对照组的细胞凋亡率比较有明显差异(P<0.01);流式细胞仪检测到早期细胞凋亡率随NGF浓度的增高而增加,各浓度组与对照组的细胞凋亡率比较有明显差异(P<0.01)。结论:采用Sephadex G75凝胶过滤及CM Sepharose CL-6B阳离子交换柱提取得到的眼镜蛇毒NGF能诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡且呈剂量依赖关系。

关 键 词：神经生长因子 MGC-803细胞 细胞凋亡 

分 类 号：R996.3[医药卫生—毒理学]