用 Digoxigenin 标记核酸探针检测 EDS-76 病毒核酸的研究  

Deteetion of EDS76 Virus Nuvleic Acid by Digoxigenin labeled DNA Probe

作　　者：孙刚[1,2] 潘兴广[1,2] 刘尚高[1,2] 

机构地区：[1]黑龙江省兽医卫生防疫站 [2]中国农业大学动物医学院

出　　处：《中国畜禽传染病》1998年第1期40-42,共3页

摘　　要：用ＥＤＳ７６病毒标准ＡＶ１２７株和分离株（Ｂ９６株）感染鸭胚，提取病毒核酸，分别经ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切，获得图形和大小相似的酶切片段。分别进行ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ单酶切，也得到相似结果。病毒ＤＮＡ经ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切后，与ＰＵＣ１９质粒载体重组，并转化到ＥｃｏｌｉＪＭ１０１中，筛选出一个插入片段（Ｇ片段）约为２７ｋｂ的重组质粒。用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｍｉｎ标记ＥＤＳ７６ＤＮＡＧ片段（ＥｃｏＲｌ和Ｐｓｔｌ双酶切片段）及含该片段的重组质粒分别制备探针，对ＥＤＳ７６病毒ＤＮＡ进行斑点杂交，两种探针均为阳性，而对照组ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＬＴＶ、ＩＢＤＶ正常鸭胚尿囊液的核酸为阴性。且后一种探针的敏感性高于前者，它的ＤＮＡ检出限量为４ｐｇ水平。结果表明，两种探针具有高度的特异性、敏感性。After　a　standard　EDS76　strain　AV　127　virus　or　a　field　isolate　strain　B96　virus　was　inoculated　in　duck　embryos,viral　DNA　was　extracted　from　the　duck　embryo　allamoic　fluids　and　digested　with　endonuclease　EcoRI　and　PstI,The　produced　fragments　were　very　similar　in　restriction　patterns　and　size　of　fragments,An　EDS76　virus　DNAG　fragment　with　27kb　was　obtained,The　fragment　was　recombined　with　PUC　19　plasmid　lineared　with　the　same　restriction　enzyme,then　it　was　trasformed　into　E　coli　JM　101,The　recombinant　which　has　an　inserted　fragment　with　27kb　was　obtained,The　recombinant　and　the　EDS76　virus　DNAG　fragment　were　labelled　with　digoxigenin　as　DNA　probes　for　EDS76　virus,Dotblot　bybridiztion　with　the　two　probes　showed　positive　result　for　EDS76　virus　DNA,but　negative　for　the　nucleic　acid　samples　obtained　from　NDV,IBV,ILTV,IBDV　and　duck　embryo　allantoic　fuild,The　sensitivity　of　the　recombinant　plasmid　PUC19　probe,DNAdetection　limit　being　4pg　was　superior　to　that　of　the　EDS76　virus　DNAG　fragmentprobe,It　was　demonstrated　that　two　probes　were　of　high　specificity　and　sensitivity.

关 键 词：减蛋综合症 病毒 核酸探针 鸡病 

分 类 号：S854.43[农业科学—临床兽医学] S858.315.3[农业科学—兽医学]