猪CACNA1S基因部分序列的克隆、测序及SNP检测  

作　　者：方晓敏[1,2] 徐宁迎[3] 任守文[1] 

机构地区：[1]江苏省农业科学院畜牧研究所 [2]浙江大学动物科学院,杭州310029 [3]浙江大学动物科学院

出　　处：《中国科学（C辑）》2008年第1期52-59,共8页Science in China(Series C)

基　　金：国家自然科学基金(批准号:30371024);国家重点基础研究发展计划(批准号:2006CB102101)资助项目

摘　　要：CACNA1S是钙离子通道主效亚基α1亚单位的编码基因,该基因突变会导致人(Homo sapiens)低钾性周期性麻痹和恶性高温综合征.目前CACNA1S基因的研究主要集中在人和模式动物上,而在家畜中的研究少见报道.本研究以金华猪(115头)、皮特兰猪(30头)、金华猪与皮特兰猪杂交产生的金皮F2代杂种猪(126头)、大约克猪(23头)为研究对象,根据人CACNA1S基因序列设计引物,对猪基因组DNA进行PCR扩增、克隆测序,并与人相应序列作同源性比较,然后采用PCR-SSCP技术检测序列中可能存在的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,并对有合适内切酶存在的突变点应用PCR-RFLP技术进行验证.结果表明:(ⅰ)用6对引物对猪基因组DNA进行扩增,共克隆得到猪CACNA1S基因约5211bp的DNA序列,其中外显子区域,猪与人同源性为82.6%,序列已递交GeneBank收录(登录号DQ767693);(ⅱ)在克隆得到的DNA序列中,共检测到57个单核苷酸突变点,其中外显子区域存在24个;(ⅲ)突变位点的PCR-RFLP验证与PCR-SSCP检测结果一致,经与GenBank公布的猪CACNA1S基因EST小片段(Bx914582,Bx666997)比较,相应长度核酸序列内本实验检测到的11个SNP位点中,有8个位点的碱基突变与2个EST片段间存在的碱基差异相同.

关 键 词：猪(Sus Scrofa) CACNA1S 单核苷酸多态(SNP) PCR-SSCP PCR-RFLP 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]