人胰腺干细胞建系及移植诱导胰岛治疗大鼠糖尿病  

作　　者：效梅[1] 安立龙[1] 杨学义[2] 葛昕[2] 乔海[2] 赵婷[2] 马霄飞[2] 樊敬庄[2] 朱梦漾 窦忠英[2] 

机构地区：[1]广东海洋大学农学院动物医学系,湛江524088 [2]西北农林科技大学,国家干细胞工程技术中心陕西分中心,杨凌712100 [3]Department of Pharmacology, Quillen College of Medicine, East Tennessee State University, Johnson City 37614, USA

出　　处：《中国科学（C辑）》2008年第8期699-707,共9页Science in China(Series C)

基　　金：国家重点基础研究发展计划(批准号:G1999054301);国家高技术研究发展计划(批准号:2002AA216161);国家自然科学基金(批准号:39970363);教育部重点项目(批准号:103160);陕西省重点攻关项目(批准号:2002K01-G3);广东省自然科学基金(批准号:04011471);广东省教育厅科学基金(批准号:2003-1009)项目资助

摘　　要：供体不足已成为移植胰岛治疗Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病的主要障碍,分离克隆胰腺干细胞作为种子细胞并诱导其分化为功能性胰岛可提供丰富的移植资源.本研究从人流产胎儿胰腺组织分离获得1例单克隆胰腺干细胞系.无菌取流产胎儿胰腺组织,0.1%Ⅳ型胶原酶消化分离为单个细胞和细胞团.低糖DMEM+10%FBS培养,单个细胞和细胞团贴壁,原代上皮样胰腺干细胞克隆性生长.0.25%胰蛋白酶+0.04%已二胺四乙酸(EDTA)消化传代,成纤维样细胞和其他细胞逐渐被消除,上皮样胰腺干细胞逐渐被纯化.克隆环筛选,获得单克隆人胰腺干细胞.在培养液中添加10ng/mL表皮生长因子(EGF),单克隆人胰腺干细胞快速生长至单层,呈铺路石样.继续传代培养,1例来源于4月龄男性流产胎儿胰腺干细胞已传50代.液氮冷冻保存细胞1×109个以上.染色体核型分析,该干细胞系为正常的二倍体细胞.免疫组织化学反应,共表达pdx1,glucagon,nestin及CK19蛋白,不表达insulin,CD34,CD44及CD45.RT-PCR检测,转录pdx1,glucagon,nestin及CK19的mRNA,不转录insulin.β-巯基乙醇诱导,分化为神经细胞,免疫组织化学反应表达NF蛋白.烟酰胺诱导,分化为DTZ染色阳性,转录表达insulin,分泌insulin和C肽的功能性类胰岛.将单克隆人胰腺干细胞体外诱导胰岛移植在STZ制备的糖尿病大鼠肾囊内,能降低糖尿病大鼠血糖水平,延长寿命.

关 键 词：胰腺干细胞 单克隆 分化 移植 人 

分 类 号：R587.1[医药卫生—内分泌]