组蛋白乙酰转移酶PCAF在原核细胞的表达及其生物学活性检测  

Prokaryotic Expression and Acetylation Assays of Histone Acetyltransferase PCAF

作　　者：李卫中[1] 张丹桂[1] 曾俊[1] 王革非[1] 陈小璇[1] 陈幼莹[1] 李康生[1] 

机构地区：[1]汕头大学医学院微生物学免疫学教研室,汕头515031

出　　处：《中国生物工程杂志》2009年第1期12-16,共5页China Biotechnology

基　　金：国家自然科学基金(30571674);广东省自然科学基金(05008347)资助项目

摘　　要：p300/CBP相关因子(p300/CBP-associated factor,PCAF)是真核细胞内一种重要的组蛋白乙酰转移酶,它主要通过催化核心组蛋白的乙酰化,促进特定基因的转录,参与细胞内多种生物学过程。国内目前尚没有制备出具有生物学活性的组蛋白乙酰转移酶PCAF的报道。为此,PCAF全长cDNA被克隆入原核表达载体pGEX-5X-1,通过对诱导条件进行优化,实现了PCAF在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中的高效可溶性表达并进行了亲和纯化。利用体外乙酰转移酶活性分析实验,检测到所表达的GST-PCAF融合蛋白能够使组蛋白H3发生乙酰化。这种具有生物学活性的PCAF蛋白的成功制备为进一步研究PCAF的转录调控功能以及它与其它蛋白间的相互作用奠定了基础。P300/CBP-associated factor （PCAF）, an important member of histone acetyhransferase family （HATs） within eukaryotic cells, is capable of inducing the acetylation of histone, promoting the transcription of specific genes and involving in many biological effects. In the present study, full-length eDNA of PCAF was inserted into plasmid pGEX-5x-1, then the soluble protein GST-PCAF was expressed in E. coli BI21 （DE3） after the optimization of inducing conditions. The recombinant protein was further purified with affinity chromatography and tested the activity by in vitro acetylation assays. High efficient PCAF protein produced by this method could serve for the study on the role of PCAF in gene regulation and the interaction between PCAF and other proteins.

关 键 词：p300/CBP相关因子 原核表达 乙酰转移酶活性分析 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]