重组人组织因子RNA干扰穿梭载体的构建及其体外鉴定  

作　　者：张园[1] 李志樑[1] 邱健[2] 易绍东[2] 董凤英[2] 

机构地区：[1]南方医科大学珠江医院心血管内科,广州510282 [2]广州军区广州总医院心血管内科,广州510010

出　　处：《广东医学》2009年第2期177-179,共3页Guangdong Medical Journal

基　　金：广东省科技计划项目(编号:2006B36008015)

摘　　要：目的利用RNA干扰(RNAi)技术,以人组织因子(TF)基因为靶基因,构建携带发夹结构的TF-shRNA的穿梭表达载体。方法在以往研究的基础上,设计具有小发夹结构的TF-shRNA序列,经退火后成为互补双链,然后将其克隆至pShuttle Vector1.0-CMV,转化E.coli DH5a菌株,提取重组穿梭质粒行酶切鉴定和测序,RT-PCR法检测其沉默TF基因的效果。结果成功构建了携带TF-shRNA的穿梭表达载体,经限制性内切酶酶切和测序软件分析证实,与设计序列同源性达98%以上;采用多重比较进行统计学分析结果显示,重组质粒pShuttle-TF-shRNA能显著性降低293细胞中TFmRNA表达,转染后24,48和72h细胞中TFmRNA表达含量显著降低,有统计学意义(P=0.000)。结论成功构建了针对人TF基因的穿梭表达载体,为将TF作为治疗靶点提供了实验基础。

关 键 词：组织因子 短发夹结构RNA干扰 基因沉默 

分 类 号：R392-33[医药卫生—免疫学] R394[医药卫生—基础医学]