缘毛雀麦ISSR-PCR反应体系的建立和优化  

Studies on Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Bromus ciliatus L.

作　　者：蔡丽艳[1] 石凤翎[1] 李志勇[2] 师文贵[2] 李鸿雁[2] 游国卿[1] 马廷兰 戴军 

机构地区：[1]内蒙古农业大学生态环境学院,内蒙古呼和浩特010019 [2]中国农业科学院草原研究所,内蒙古呼和浩特010010 [3]乌兰察布市集宁区水务局,内蒙古集宁012000 [4]乌兰察布市察右中旗扶贫办公室,内蒙古察右中旗013550

出　　处：《种子》2009年第1期3-6,共4页Seed

基　　金：农作物基因资源安全保存评价关键技术研究(2006BAD13B10-08);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项基金(06-1-06);内蒙古科技厅草业专项(20071923)

摘　　要：以缘毛雀麦基因组DNA为模板,对ISSR反应体系中的一些重要参数进行探索和优化试验,初步建立了一套雀麦属牧草ISSR分析的优化反应体系及反应程序。在20μl反应体系中,含有2.0 mmol/L Mg2+、2.0 U Taq酶、0.3 mmol/LdNTP、0.5μmol/L引物和30 ng模板DNA。反应程序:第1个循环,基因组DNA经94℃预变性5 min;45个循环为94℃变性45 s,54℃退火60 s,72℃延伸90 s;最后1个循环完成后,在72℃下延伸7 min。In this paper, the main indices of ISSR were studied taking the genomic DNA extracted from Bromus ciliatus L. as template. The optimum reaction system and reaction process of ISSR were found. The results showed that the reaction system was 20μl. It included 2.0 mmoL/L Mg^2＋ , 2.0 U Tap enzyme, 0.3 mmol/L dNTP,0.5μmol/L primer,30 ng DNA template. The reaction program was devised for 5 minutes at 94 ℃ in the first circle,45 seconds at 94 ℃ for 45 cycles,54 ℃ for 60 seconds,72 ℃ for 90 seconds,and 72 ℃ for 7 minutes in the final cycle.

关 键 词：缘毛雀麦 基因组DNA ISSR 反应体系 

分 类 号：S813.3[农业科学—畜牧学] S543.8[农业科学—畜牧兽医]