利用正交设计优化一品红SRAP反应体系  

Optimization of SRAP-PCR System in Poinsettia Based on Orthogonal Design

作　　者：姜维华[1] 陶俊[1] 冯立国[1] 苏家乐[2] 

机构地区：[1]扬州大学园艺与植物保护学院,江苏扬州225009 [2]江苏省农业科学院园艺研究所,江苏南京210014

出　　处：《苏州科技学院学报（自然科学版）》2009年第1期48-52,共5页Journal of Suzhou University of Science and Technology （Natural Science Edition）

基　　金：江苏省农业科技攻关项目(BE2006341;BE2007309);江苏省农业厅三项工程项目(SX2008043)

摘　　要：运用L16(45)正交设计对影响一品红SRAP反应的5个因素(DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶)在4个水平上进行优化试验,PCR结果采用DPSV3.01软件分析。结果表明,各因素对SRAP反应的影响依次为:Mg2+>引物>dNTPs>DNA模板>Taq酶;一品红SRAP反应最佳体系为:50μL的PCR体系中含有Mg2+2.5mmol·L-1、引物500pmol·L-1、dNTPs0.20mmol·L-1、DNA模板100ng、Taq酶1.0U;应用最佳反应体系对PCR程序中的退火温度进行优化,得出SRAP-PCR反应适宜的第一步退火温度为36℃,第二步退火温度为50℃。The orthogonal design was used to optimize SRAP-PCR amplification system of poinsettia（Euphorbia pulcherrima） on four levels,the experiment was performed on five factors： the concentration of Mg2＋, DNA template ,dNTPs,primer and Taq DNA polymerase. The data generated by SRAP-PCR were analyzed by software DPS V3.01. The results showed that the effective degree of the factors on the SRAP reaction was in the order： Mg2 ＋〉 Primer 〉dNTPs 〉DNA template 〉Taq DNA polymerase. The optimal concentration of the five important components,i.e. Mg2＋,primer,dNTPs,template DNA and Taq DNA polymerase in 50μL SRAP reaction system were 2.5 mmol-L-1,500 pmol·L-1,0.20 mmol·L-1, 100 ng and 0.2 U respectively. The annealing temperature was 36 ℃ during the first five cycles and 50 ℃ during the following 35 cycles.

关 键 词：一品红 SRAP 正交设计 优化 

分 类 号：S685.23[农业科学—观赏园艺]