猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp基因的克隆与原核表达  

Cloning and Expression of RNA-dependent RNA Polymerase Gene of PRRSV

作　　者：蔡汝健[1,2] 宋长绪[1] 郝永清[2] 杨鼎[2] 何锦玲[3] 

机构地区：[1]广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生实验室,广东广州510460 [2]内蒙古农业大学动物科技学院,内蒙古呼和浩特010018 [3]西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100

出　　处：《动物医学进展》2009年第2期16-18,共3页Progress In Veterinary Medicine

基　　金：国家食品安全重大专项(2001BA804A31);广东省农业科技攻关项目(2003B21404、20052490100和2006B20301013);广东省自然科学基金(04002083);广东省自然基金重点项目(06105311)

摘　　要：将猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA依赖性的RNA聚合酶(RdRp)基因进行克隆、表达,并获得纯化重组蛋白,为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp的功能奠定基础。以RdRp基因cDNA为模板,用PCR扩增出RdRp基因片段,应用定向克隆策略将扩增后片段与高效表达载体pET32a(+)重组,阳性克隆重组质粒经酶切及测序鉴定,IPTG诱导高效表达。PCR法扩增出720 bp的片段,酶切及测序鉴定获得正确的重组质粒,在大肠埃希菌LB21中表达得到分子质量约为46 ku的融合蛋白。成功克隆及表达了猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp基因。To Clone and express PRRSV RNA-dependent RNA polymerase gene,and gain recombinant prorein,the RdRp fragment was amplified by PCR with the template of PRRSV genome RNA, the fragment was cloned into expression vector pET32 a （＋）. The positive transformant was identified by endonuclease digestion and sequencing. The recombinant protein was expressed with highyield by IPTG induction. The fragment of RdRp gene with size 720 bp was amplified by PCR. The correct recombinant piasmid was characterizedby endonuclease digestion and sequenction. The recombinant protein was expressed in E. coli BL21 with relative molecular weight 46 ku. The PRRSV RdRp gene was cloned and expressed successfully.

关 键 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 RdRp基因 克隆 原核表达 

分 类 号：S858.28[农业科学—临床兽医学] S852.659.6[农业科学—兽医学]