表达绿色荧光蛋白的伪狂犬基因缺失病毒的构建  

Expression of Green Fluorescent Protein Gene Deletion Mutant of the Pseudorabies Virus Construction

作　　者：王鑫[1] 李文刚 吴凤笋 魏娟[1] 耿红娟[1] 靳永健 

机构地区：[1]河南农业大学,郑州450002 [2]郑州牧业高等专科学校,郑州450011

出　　处：《中国畜牧兽医》2009年第1期41-44,共4页China Animal Husbandry & Veterinary Medicine

基　　金：河南杰出人才创新基金资助项目(0621002000);规模化养猪重大疫病基因工程疫苗及配套ELISA试剂盒研制

摘　　要：通过酶切、补平、连接的方法对PUSK载体质粒进行改造,消除了该载体上的BamHⅠ和HindⅢ两酶切位点。根据pAcGFP1-C1基因序列设计1对引物,分别在上、下游引物的5′端引入了NotⅠ酶切位点,通过PCR扩增将目的基因AcGFP(包括GFP、CMV、MCS、SV40 Poly(A))克隆入经改造的PUSK载体内,构建了转移载体质粒PUSG。利用脂质体介导的方法,将转移载体质粒PUSG与伪狂犬病病毒基因组DNA共转染PK-15细胞。于荧光显微镜下48 h便能观察到绿色荧光,用吸管将有荧光的病变细胞吸出,经连续传代3次得到了纯化病毒。重组病毒的获得为下一步研制二价或多价疫苗的筛选提供了方便。Through digestion, fill-linking method to transform PUSK vector to eliminate the vector of BamH Ⅰand Hind Ⅲ restriction sites. According pAcGFP1-Cl gene sequencing to designe primers, in the upstream and downstream primers 5＇end introduced Not Ⅰ restriction sites, will be amplified by PCR fluorescent protein gene AcGFP（including CMV, MCS, SV40 Poly （A）） cloned into the vector Not Ⅰ restriction sites of the PUSK. Use of lipid-mediated method, vector plasmid PUSG and PRV genomic DNA transfection of PK-15 cells. Green fluorescent will be observed in 48 hours under fluorescence microscopy. After three consecutive passages have been purified virus. The recombinant virus will be providing a convenient for the next two or trivalent vaccine selection.

关 键 词：伪狂犬病病毒 PUSK gG基因 pAcGFP1-C1 转移载体 表达 

分 类 号：Q782[生物学—分子生物学]