GILZ真核表达载体的构建及其表达定位  

Construction of HA-GILZ eukaryotic expression vector and its identified expression in cell line

作　　者：王毅飞[1] 邢飞跃[2] 蔡德鸿[1] 陈宏[1] 莫永炎[3] 伊娜[4] 

机构地区：[1]南方医科大学珠江医院内分泌科,广东广州510282 [2]暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心,广东广州510632 [3]南方医科大学病理生理教研室,广东广州510515 [4]广州市中医院内分泌科,广东广州510130

出　　处：《中国病理生理杂志》2009年第3期618-621,共4页Chinese Journal of Pathophysiology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30470829)

摘　　要：目的:克隆、构建HA标签的糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白GILZ表达载体,观察其在细胞中表达与定位,为研究GILZ在脂肪细胞分化中的作用提供工具。方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法从C3H10T1/2细胞中扩增带有HA标签的GILZcDNA编码区,并将其重组于真核表达载体pcDNA3中。经酶切、序列鉴定分析后,将该重组质粒通过Lipofectamine2000脂质体和CaCl2方法,分别转染C3H10T1/2和293T细胞,用HA抗体免疫荧光和免疫印迹法检测GILZ在细胞内的表达、分布及分子量大小。结果:HA-GILZ表达载体经酶切鉴定和测序分析确认构建成功,并在C3H10T1/2和293T细胞中获得了高效表达。在荧光显微镜下,GILZ主要表达于细胞质内,分子量约20kD。结论:成功构建HA-GILZ基因表达载体并表达于C3H10T1/2细胞质中,为GILZ的功能研究奠定了基础。

关 键 词：糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白 C3H10T1/2细胞 真核表达载体 

分 类 号：R318.15[医药卫生—生物医学工程]