乙型肝炎病毒X基因对c-met基因启动子区的调控作用  

The effect of hepatitis B virus X protein on the c-met promoter activity in HepG2 cells

作　　者：谢斌[1] 唐春[1] 陈平[1] 苟元斌[1] 肖静[1] 杜虎[2] 

机构地区：[1]第三军医大学大坪医院野战外科研究所肝胆外科,重庆400042 [2]重庆市第三人民医院泌尿外科

出　　处：《中华肝脏病杂志》2009年第4期292-296,共5页Chinese Journal of Hepatology

基　　金：重庆市科委自然科学基金计划资助项目（CSTC2006BB5107）

摘　　要：目的明确乙型肝炎X基因（HBx）对c-met基因启动子区的调控及其在肝细胞癌侵袭和转移中的机制。方法将HBx表达质粒转染HepG2细胞，采用Western b1ot方法比较转染前后HBx对原癌蛋白质c-met（cmet）表达的影响，进一步将c-met基因启动子区分成5个（包括全部序列）不同长度的片段，然后与PGL3-Basic荧光素酶报告基因系统连接构建成重组质粒，将上述质粒与HBx表达质粒共转染于HeDG2细胞中，通过荧光素酶测定、启动子区突变分析及侵袭试验比较转染前后HBx对cmet表达调控的影响。荧光素酶活性值采用ANOVA单因素方差分析，侵袭细胞数统计采用t检验。结果HBx能够增强cmet的表达；通过对c-met基因启动子区缺失分析，确定了cmet基因启动子区（183bp～100bp）是HBx作用的调控区域，进一步对该区域可能的转录因子结合位点（SP1-1、SP1-2、AP-2）进行突变分析，发现这3个结合位点均参与了HBx对Cmet基因启动子区的调控。测定全部缺失构建体荧光素酶活性结果显示，-184上游部分序列缺失后对HBx的反应有轻微的降低，当-183bp／122bp、121bp／100bp两个片段缺失后，启动子对HBx的反应均有明显降低，F=40．37，P〈0．01；cmet启动子突变分析显示，HBx诱导的荧光素酶活性在SP-1-1、SP-1-2、AP-2突变体组中明显下降，F=235．3，P〈0．01。Matrige1侵袭试验检测结果显示，转染pCEP4-X-FLAG表达质粒的HepG2细胞侵袭性增加，穿膜细胞数为（74．33±6．24）个，而未转染组穿膜细胞数为（28．24±3．05）个，t=9．68，P〈0．01。结论HBx引起肝细胞癌的侵袭转移可能是通过对cmet基因启动子区（-183bp～-100bp）转录因子SP-1、AP2结合位点的调控来实现的，但是该过程中所涉及的信号通路仍有待进一步研究。Objective To confirm the effect of hepatitis B virus X （HBx） protein on the c-met promoter activity in HepG2 cells. Method The expression of c-met protein was detected by western blot in HBx-transfected HepG2 cells, the human c-met promote activity was checked by luciferase assay using five different constructs with deletion or point mutation. Results HBx protein stimulated the expression of the c-met in HepG2 cells. The enhanced expression of c-met in HBx-transfected cells was mediated by the activa- tion of AP-2 and SP-1 transcriptional activity at the c-met promoter region （-183bp-100bp）, HBx increased the invasiveness of HepG2 cells as determined by Matrigel invasion assay. Conclusion These results suggests that HBx induces the expression of c-met through the activation of AP-2 and SP-1 activity at the promoter region; in addition, our data indicate that HBx stimulates the invasive potential of HepG2 cells.

关 键 词：癌 肝细胞 X蛋白 肝炎病毒 乙型 原癌蛋白质c-met 启动子 转录因子 

分 类 号：R373[医药卫生—病原生物学]