PRRSV变异株ORF6基因重组杆状病毒的构建及其在昆虫细胞的表达  

Construction of recombinant baculovirus expressing ORF6 gene of PRRSV

作　　者：曹宗喜[1,2] 潘全会 齐岩[1,2] 孔留五[1,2] 何逸民[1,2] 罗玉均 秦宏阳[1,2] 张翔峰[1,2] 张得玉[1,2] 张桂红[1,2] 

机构地区：[1]华南农业大学兽医学院,广东广州510642 [2]农业部动物疫病防控重点开放实验室,广东广州510642 [3]美国礼来(亚洲)公司动物保健处,上海200021

出　　处：《中国预防兽医学报》2009年第4期261-265,共5页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：863计划(2006AA10A204);国家生猪现代农业产业技术体系;广东省农业类计划项目(2007A020300006-4)

摘　　要：参照GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XH-GD株ORF6(M蛋白)基因序列,设计合成了一对引物,扩增PRRSV ORF6基因。将该基因克隆于转移质粒载体pFcDNA3.1(+)中,获得重组转移质粒pFcDNA3.1-ORF6并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒Bacmid-ORF6,再将其转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBacmid-ORF6,经PCR鉴定证实目的基因正确地插入到杆状病毒基因组的CMV启动子下游;经过间接免疫荧光试验(IFA)检测,M蛋白在Sf9细胞中得到了表达,而且表达的产物具有特异免疫学反应性。The ORF6 （M protein） gene of PRRSV was amplified by PCR using a pair of primers based on the ORF6 sequences of a mutant PRRSV. The PCR product was cloned into the transfer vector pFcDNA3.1 （＋） and transformed into DH10Bac-host cells to produce recombinant shuttle plasmids Bacmid-ORF6, which was then used to transfect Sf9 insect cells. Indirect flurescent assay （IFA） confirmed that the ORF6 gene was expressed in Sf9 cells. The expression product could specially react to the sera of PRRSV.

关 键 词：PRRSV 杆状病毒表达 克隆 

分 类 号：S852.651[农业科学—基础兽医学]