人肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物cDNA克隆和高效表达  

作　　者：邓义斌[1] 陈香美[1] 廖洪军[1] 叶一舟[1] 徐启河[1] 于力方[1] 

机构地区：[1]解放军总医院肾科,北京100853

出　　处：《中国科学（C辑）》1998年第2期179-185,共7页Science in China(Series C)

基　　金：中国人民解军"九五"重点课题基金!(96Z0 5 6 );国家自然科学基金优秀中青年人才基金资助项目!(批准号 :3940 0 0 6 1)

摘　　要：利用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,从中国正常人肾小球系膜细胞总RNA中扩增出人纤溶酶原激活物抑制物 (PAI 1 )基因cDNA编码区序列 ,并定向亚克隆至pUC1 9质粒 ,克隆的PAI 1cDNA去除了信号肽核苷酸序列并加入新的起始密码ATG ,编码区序列与文献报道的人内皮细胞PAI 1cDNA序列完全相同 .将PAI 1cDNA定向亚克隆至原核表达质粒 pBV2 2 0 ,构建了重组PAI 1基因表达质粒pBV2 2 0 PAI 1 ,在大肠杆菌中得到了高效表达 ,重组PAI 1蛋白表达占菌体总蛋白 45 % .Westernblotting检测 ,在分子量约为 43.0ku处出现一特异性蛋白质条带 .对形成包涵体的表达产物进行变复性处理及FPLC纯化 ,获得纯度 97%以上的潜伏态重组PAI 1 .经 4mol/L盐酸胍激活后 ,重组PAI 1具有与天然PAI 1同样的生物学活性 ,对尿激酶型纤溶酶原激活物 (u PA)具有显著抑制活性 .

关 键 词：PAI-1 CDNA 无性系 肾功能衰竭 肾小球系膜细胞 

分 类 号：R692.5[医药卫生—泌尿科学]