pFLAG-CMV-TRAF1真核表达载体的构建及其对NF-κB信号通路的影响  

Construction of the pFLAG-CMV-TRAF1 eukaryotic expression vector and its inhibitory influence of NF-κB

作　　者：黄晓碧[1] 王建[2,3] 王晓辉[2,3] 姚景辉[1] 原艳芝[2,3] 杨晓明[2,3] 汪思应[1] 

机构地区：[1]安徽医科大学病理生理学教研室,合肥230032 [2]军事医学科学院放射与辐射医学研究所 [3]北京(国家)蛋白质组研究中心,北京100850

出　　处：《安徽医科大学学报》2009年第2期147-150,共4页Acta Universitatis Medicinalis Anhui

基　　金：国家自然科学创新群体基金资助项目(编号:30621063);国家高新技术研究发展计划(863计划)资助项目(编号:2006AA02A310);国家重点基础研究发展规划(973计划)资助项目(编号:2006CB910802);安徽省人才开发基金资助项目(编号:2002Z035)

摘　　要：目的构建人TRAF1真核表达载体,应用荧光素酶报告基因实验研究TRAF1对NF-κB报告基因活性的影响。方法采用PCR技术扩增出TRAF1编码基因,将其构到真核表达载体pFlag-CMV-2上。用脂质体将构建的真核表达载体瞬时转染HEK293细胞,用Western blot检测TRAF1蛋白是否表达。用荧光素酶报告基因实验验证其对NF-κB转录活性的影响。结果成功克隆TRAF1编码基因至相应表达载体上。构建的TRAF1真核表达载体使HEK293细胞高表达TRAF1蛋白;在肿瘤坏死因子(TNF-α)的刺激下可以抑制NF-κB的转录活性。结论TRAF1负调控NF-κB的活性,为进一步研究TRAF1的功能提供了线索。Objective To construct the eukaryotic vector expressing TRAF1 cDNA and searched TRAF1 to active or inhibit NF-κB. Methods The coding gene of TRAF1, amplified by polymerase chain reaction, was cloned into pFLAG-CMV-2 vector. The vector was then transfected transiently into HEK,293 cell by lipofectamine. The expres- sion of TRAF1 was detected by Western blot . Then we used luciferase assay search TRAF1 how to influence NF- κB. Results The coding gene of TRAF1 was successfully cloned into pFLAG-CMV-2 vector, Abundant TRAF1 protein expressed in HEK293 cell transfected with pFLAG-CMV-2 vector. Luciferase assay elucidated TRAF1 may in- hibited NF-κB with TNF-a stimulation. Conclusion TRAF1 negatively regulates NF-κB activation,which provide a clue for further study on the functions of TRAF1.

关 键 词：NF-ΚB 基因 转录 肿瘤坏死因子-alpha 

分 类 号：R329.2[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学] R341.32[医药卫生—基础医学]