绵羊痘病毒甘肃流行株糖蛋白基因ORF117的克隆及其原核表达  

Cloning and prokaryotic expression of glycoprotein-encoding ORF117 from sheep pox virus Gansu strain

作　　者：王晓霞[1,2,3] 郑亚东[1,2] 骆学农[1,2] 陈轶霞[4] 李辉[1,2] 侯俊玲[1,2] 于三科[3] 才学鹏[1,2] 

机构地区：[1]中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室 [2]中国农业科学院人兽共患病重点实验室,甘肃兰州730046 [3]西北农林科技大学动物医学院,陕西杨陵712100 [4]西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州730046

出　　处：《中国预防兽医学报》2009年第5期337-341,共5页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：兰州市城关区农业科技攻关项目(07-32);中国农业科学院兰州兽医研究所所长基金(366)

摘　　要：以甘肃景泰疑似羊痘(SP)患病绵羊的皮肤组织中提取的总DNA为模板,经PCR扩增获得SP病毒(SPV)ORF117基因。测序后分析表明,该基因由591个核苷酸组成,编码196个氨基酸;将该基因克隆于pET32载体中,构建重组表达质粒pET-ORF117,用IPTG在不同条件下诱导表达,确定其最佳表达条件。SDS-PAGE电泳分析表明,表达的融合蛋白分子质量为42 ku,主要以包涵体的形式存在。在IPTG浓度为0.1 mM、温度为37℃、诱导6 h时表达量最大,约占菌体蛋白的30%。Western blot试验表明,融合蛋白可被羊痘阳性血清识别,这为研究其在新型疫苗和诊断的研究奠定了基础。The glycoprotein-encoding ORF117 gene was cloned by PCR from genomic DNA of sheep pox virus isolated in Jingtai, Gansu Province. Sequence comparison showed that the ORF117 gene consist of a 591 bp open reading frame coding a 196 amino acid. The gene was subcloned into pET32 expression plasmid and expressed in E.coli by IPTG induction. SDS-PAGE analysis showed that the fusion protein had a molecular weight of 42 ku and mainly existed in form of inclusion body. The expressed protein accounted for more than 30 % of the total protein mass. Western blot confirmed that the fusion protein reacted to positive serum against sheep pox.

关 键 词：绵羊痘病毒 ORF117基因 克隆 原核表达 

分 类 号：S852.654[农业科学—基础兽医学]