猪繁殖与呼吸综合征RT-PCR诊断及ORF5基因原核表达载体的构建  

作　　者：袁东波[1] 汤德元[1] 黄涛[1] 徐健[1] 王彬[1] 

机构地区：[1]贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025

出　　处：《猪业科学》2009年第5期98-100,共3页Swine Industry Science

摘　　要：参照GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒核苷酸序列,利用生物软件,设计1对ORF5基因的特异性引物,用Trizol法提取病料的总RNA,进行RT-PCR扩增后获得目的基因,将其连接到PMD18-T载体后转入大肠杆菌Top10细胞中,抽提质粒并双酶切,回收目的基因,然后克隆于原核表达载体PET-32a(+)中,通过抗性筛选、酶切鉴定和序列测定,证实得到含有目的基因的阳性克隆,本实验成功构建了猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株ORF5基因原核表达载体PET-ORF5,为进一步研究ORF5基因的原核表达及猪繁殖与呼吸综合征的基因工程疫苗的研究奠定了基础。

关 键 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因克隆 原核表达载体构建 

分 类 号：S858.28[农业科学—临床兽医学]