鼠抗人CD20单克隆抗体的制备与鉴定  

作　　者：包红霞 吴春铃[1] 李淑珍[1] 唐晓波[1] 褚晓杰[1] 王爽[1] 张家宁[1] 朱大岭[1,2,3] 

机构地区：[1]哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室 [2]哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地 [3]哈尔滨医科大学药物与内源性物质代谢省高校重点实验室,黑龙江哈尔滨150081

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2009年第5期454-456,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：黑龙江省教育厅振兴老工业基地重大科技项目(1151zgd11);哈尔滨市科技创新人才研究专项基金项目(RC2006XK003010);黑龙江省生物医药工程重点实验室研究基金(2004-001);哈尔滨医科大学医学基础学科青年科学基金项目(060043)

摘　　要：目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。结果:CD20-GST和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20mAb与CD20蛋白具有良好的反应性。结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础。

关 键 词：CD20 原核表达 融合蛋白 抗体制备 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]