谷氨酰胺抑制内毒素诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞TNF-α释放  

Glutamine attenuates tumor necrosis factor-α release in lipopolysaccharide-induced alveolar type Ⅱ epithe- lial cells

作　　者：张峰[1] 王新颖[1] 王伟雅[1] 李宁[1] 黎介寿[1] 

机构地区：[1]南京大学医学院临床学院/南京军区南京总医院普通外科,南京210002

出　　处：《中华急诊医学杂志》2009年第5期462-465,共4页Chinese Journal of Emergency Medicine

基　　金：国家自然科学基金资助项目（30500404）;江苏省自然科学基金资助项目（BK2006530）

摘　　要：目的研究谷氨酰胺（Gln）调节内毒素（LPS）诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）肿瘤坏死因子（TNF）-α分泌及谷胱甘肽（GSH）在其中的作用。方法原代培养成年雄性SD大鼠AECⅡ细胞，原代培养24h后，分为空白对照、10．0mmol／L Gln，1μg／mL LPS、LPS＋（0．5、2．0和10．0mmol／L）Gln六组，每组3个孔。LPS刺激24h，Gin在LPS刺激前8h加入；另一组实验分为1μg／mL LPS，LPS＋10．0mmol／L Gln，LPS＋100μmol／L丁硫氨酸亚砜胺（BSO）、LPS＋Gln＋（1、10和100μmol／L）BSO六组，每组3个孔。LPS刺激24h，BSO和Gln在LPS刺激前8h加入。以二硫双硝基苯甲酸（DTNB）法测定细胞内GSH浓度，酶联免疫（EHSA）法测定细胞上清TNF-α水平。统计学方法用方差分析（LDS-t检验）比较各组间差异。结果谷氨酰胺可以提高IPS诱导大鼠AECⅡ细胞的GSH浓度，降低TNF-α的水平，其作用随浓度的增加而增加，在10mmol／L浓度最为显著，GSH水平从（50．69±3．04）pmol／mg cell上升到（126．74±7．13）pmol／mg cell（P〈0．01），TNF-α水平从（1104．5±48．8）pg／mL下降到（329．67±48．27）pg／mL（P〈0．01）；同时，谷氨酰胺的作用可以被10μmol／L以上浓度BSO显著阻断（P〈0．01）。结论谷氨酰胺可以抑制LPS诱导的大鼠AECⅡ细胞TNF-α的释放，其作用可能是通过促进GSH的合成而实现的。Objective To investigate the role of glutathione （GSH） synthesis in the regulation of Glutamine （Gin） on TNF-α release in lipopolysaceharide （LPS）-stimulated alveolar epithelial type Ⅱ cells （AEC Ⅱ ）. Method Primary cultured AEC Ⅱ were divided into six groups, including control, 10.0 mmol/L Gin, 1μg/mL LPS and LPS＋ （0.5, 2.0 and 10.0 mmol/L） Gln. In another set of experiments, AECI] were divided into six groups including 1μg/mL LPS, LPS ＋ 10.0 mmol/L Gin, LPS ＋ 100 μmol/L L-buthionine-（S, R）-sulfoximine （BSO）, LPS ＋ Gln ＋ （ 1,10 and 1130/maol/L） BSO. Each group had three samples. BSO and Gln were added at 8 hours before LPS challenge. After 24 hours of LPS stimulation, calls were obtained for GSH measurement by 5, 5＇-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid） （DTNB） method. TNF-α level in the supernatant was determined by enzyme- linked immunosorbent assay （ELISA）. ANOVA （LSD- t test） was used for statistical analysis. Results Supple- mentation of Gin increased the GSH level and attenuated TNF-α release in LPS-stimulated AEC II in a dose-depen- dant manner. GSH level increased from （50.69±3.04） pmoL/mg cell （LPS group） to （ 126.74 ±7.13） pmol/mg cell （LPS ＋ 10.0 mmol/L group） （ P 〈 0.01 ） and TNF-α level decreased from （ 1104.5 ± 48.8） pg/mL （ LPS group） to （329.67 ± 48.27） pg/mL （LPS±10.0 mmol/L group） （ P 〈 0.01）. BSO, an GSH synthesis blocker, at doses greater than 10μmol/L reversed the effect of Gln significantly （ P 〈 0.01 ）. Conclusions As a precursor of GSH, glutamine could attenuate TNF-α release in LPS-stimulated AEC Ⅱ, and the with may be mediated via GSH synthesis.

关 键 词：谷氨酰胺 谷胱甘肽 肺泡Ⅱ型上皮细胞 内毒素 肿瘤坏死因子 

分 类 号：R563[医药卫生—呼吸系统] R285.5[医药卫生—内科学]