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作 者:史沛举[1,2] 郝喜娜[1,2] 葛俊超[1,2] 王长军[2] 王晶[2] 潘秀珍[1] 唐家琪[2]
机构地区:[1]南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046 [2]南京军区军事医学研究所,江苏南京210002
出 处:《南京师大学报(自然科学版)》2009年第2期87-92,共6页Journal of Nanjing Normal University(Natural Science Edition)
基 金:国家自然科学基金(30730081,30600533,30670105);江苏省自然科学基金(BK2007013,BK2008066);南京军区医学科技创新课题(07Z045);南京军区卫生专业人才培养“122”工程项目
摘 要:通过生物信息学分析2型猪链球菌(Streptococcus suisserotype 2,S.suis2)中国强毒株05ZYH33的基因组,预测并发现猪链球菌血清浑浊因子(Opacity factor ofS.suis,OFS)的编码基因ofs.为了构建ofsN-末端片段ofs37-683的基因敲除株,首先构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为ofs37-683上、下游同源序列的基因敲除质粒,并对该质粒进行PCR和酶切鉴定.根据同源重组的原理,通过电转化方法筛选得到ofs37-683基因敲除株.PCR、测序和RT-PCR分析结果均显示ofs37-683已完全被壮观霉素抗性基因替代,证实ofs37-683基因敲除株构建成功.该敲除株的获得为进一步研究ofs在猪链球菌2型致病机制中的作用奠定基础.The gene of Opacity factor of S. suis (ors) was predicted in the genome of Streptococcus suis serotype 2 ( S. suis 2) Chinese highly virulent strain 05ZYH33 and its protein structure was characterized with Bioinformaties tools. To delete the N-terminal fragment of ofs in 05ZYH33, recombinant gene knock-out plasmid with a Spcr cassette flanked with homology arms was constructed. The plasmid was confirmed by PCR and restriction enzyme digestion. According to the principle of homologous recombination, the isogenic ofs^37-683deficient mutant was screened through electroporation transformation. PCR amplication, sequencing of its product and RT - PCR analysis confirmed that the target gene was replaced by Spcr cassette. This mutated 05ZYH33 provided a potent tool for assessing the role of ofs in the S. suis 2 infection.
分 类 号:R378.12[医药卫生—病原生物学]
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