人乳头瘤病毒16L1-E5表达质粒的构建及其蛋白表达  

Construction of prokaryotic plasmid of HPV16 L1-E5 and its expression

作　　者：左凤琼[1] 李婉宜[1] 李明远[1] 黄建[2] 李晓红[3] 吕梅励[1] 赵素兰[4] 蒋中华[1] 

机构地区：[1]四川大学华西基础医学与法医学院,四川成都610041 [2]成都电子科技大学生命科学院 [3]四川大学华西药学院 [4]四川省肿瘤医院妇科

出　　处：《西部医学》2009年第6期888-891,共4页Medical Journal of West China

基　　金：四川省科技厅基金资助(NO:2006J13-100)

摘　　要：目的构建人乳头瘤病毒16L1-E5的原核表达质粒,并进行表达融合蛋白,为下一步探讨该蛋白是否能作为疫苗的研究作准备。方法以本室已构建好的阳性质粒pET32(+)/HPV16 E5为模板,PCR获得E5基因,经SalⅠ和NotⅠ双酶切插入已构建好的pGEX4T-1/HPV16L1,通过筛选获得正确的阳性克隆pGEX4T-1/HPV16L1-E5。pGEX4T-1/HPV16L1-E5转化入BL21感受态细胞,经IPTG诱导进行目的蛋白的表达,通过测定不同时间、不同IPTG浓度和不同温度时目的蛋白表达情况,获得蛋白表达的最佳条件,SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达。结果成功构建了质粒pGEX4T-1/HPV16L1-E5,在1mmol/L IPTG、34℃、4h诱导获得最大量的目的蛋白表达。结论成功构建的pGEX4T-1/HPV16L1-E5质粒能表达出目的蛋白,为进一步研究目的蛋白功能打下了坚实的基础。Objective To construct prokaryotie expression vector PGEX4T-1/HPV16L1-E5 to observe the expression of human papillomavirus（HPV） 16 L1 and E5 fusion protein. Methods HPV16 E5 gene was amplified by PCR from PET32（＋）/HPV16E5 and inserted into the plasmid PGEX4T-1/HPV16L1 followed by Sal Ⅰ and Not Ⅰ . The recombinant plasmid pGEX4T-1 /HPV16L1-E5 was transformed into E. coli JM109 and selected with ampieillin. The positive clones were verified by restriction endonucleases Sal Ⅰ and Not Ⅰ and sequence analysis. The expression of HPV16L1-E5 protein in E coli BL21 （DE3） was identified by SDS-PAGE and Western-blotting. Results The prokaryotic plasmid pGEX4T-1 /HPV16L1-E5 was successfully constructed. E coli BL21 （DE3） transformed by the recombinant plasmid pGEX4T-1 /HPV16L1-E5 expressed HPV16L1-E5 fusion protein, efficiently. Conclusions HPV16L1-E5 fusion protein is successfully expressed, which may facilitate subsequent research of the biological function of HPV16 L1-E5 protein.

关 键 词：人乳头瘤病毒16 原核表达质粒 融合蛋白 

分 类 号：R373[医药卫生—病原生物学]