大肠杆菌tRNA^(Leu)的基因克隆、高效表达和纯化  

作　　者：李勇[1] 王恩多[1] 王应睐 

机构地区：[1]中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,上海200031

出　　处：《中国科学（C辑）》1998年第3期193-198,共6页Science in China(Series C)

基　　金：国家自然科学基金资助项目 !(批准号 :395 70 16 4)

摘　　要：用化学法合成的tRNALeu1 和tRNALeu2 的基因分别连接到 pTrc99B质粒载体上 ,转化到大肠杆菌MT10 2中 .DNA测序筛选得到与已知tRNALeu1 和tRNALeu2 的基因顺序完全相同的克隆 .对带有tRNALeu1 和tRNALeu2 基因的 2个转化子 (MT Leu1和MT Leu2 )表达条件进行了优化 ,MT Leu1和MT Leu2总tRNA中的亮氨酸接受活力分别达到 810 pmol/A2 6 0 和 5 60 pmol/A2 6 0 :tRNALeu1 占MT Leu1总tRNA的5 0 % ;tRNALeu2 占MT Leu2总tRNA的 3 0 % .经DEAE Sepharose、BD -纤维素层析柱 ,可分别将MT Leu1和MT Leu2的总tRNA纯化到 160 0pmol/A2 6 0 .首次准确地测得了 2种等受体tRNALeu的氨酰化反应动力学常数 .

关 键 词：无性系 基因表达 大肠杆菌 TRNA aaRS 

分 类 号：Q939.121[生物学—微生物学]