高致病性猪蓝耳病直接免疫荧光诊断方法的建立及其应用  

Development and application of direct immunofluorescence assay for detection of porcine reproductive and respiratory syndrome

作　　者：袁婧[1,2] 刘长明[1] 魏萍 危艳武[1] 张朝霞[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001 [2]东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨150030

出　　处：《中国预防兽医学报》2009年第6期448-453,共6页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：国家“948”计划(2006-Z6);十一五国家支撑计划(2006BAD06A07);中国农业科学院哈尔滨兽医研究所所长基金

摘　　要：以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),并用异硫氰酸荧光素(FITC)对IgG进行荧光标记,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(FA),用于检测病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中PRRSV抗原。本试验对PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学检测结果表明,接种后16h可检测到抗原阳性细胞,接种后60h～72h达到病毒增殖高峰;对病毒人工感染猪脏器组织抗原分布检测结果显示,腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体抗原阳性检测率较高;对临床10个猪场送检的38份病料平均阳性检出率为63.2%(24/38)。该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点,与RT-PCR检测结果符合率为96.3%,对几种已知猪病毒抗原无交叉反应,标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定。IFA为PRRS的临床诊断提供了一种快速、便捷、敏感、特异的检测方法。A direct immunofluorescence assay （FA） was developed for the detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV） using fluorescein isothiocyanate （FITC） labeled immunoglobulin （IgG）. Virus antigens in cell culture monolayer and tissue sections and virus propagation dynamics in MARC-145 cells was detected by the FA. The results showed that the antigen positive cells could be detected from 16 h PI, and virus propagation peaked at 60 h to 72 h PI. Antigen positive cells was found in inguinal lymph nodes, jejunum, testis, spleen, mandibular lymph nodes, mesenteric lymph nodes and tonsil, respectively. The clinical samples from 38 cases of affected pigs were evaluated using the FA, and 63.2 % （24/38） was detected PRRSV positive. The assay was sensitive, specific and reproducible, and showed 96.3 % consistence with RT-PCR detection.

关 键 词：猪繁殖与呼吸综合征 直接免疫荧光 诊断 

分 类 号：S852.651[农业科学—基础兽医学]