口蹄疫病毒非结构蛋白3D单克隆抗体的制备及鉴定  

作　　者：田美娜[1] 李永亮[1] 卢曾军[1] 付元芳[1] 袁明 刘湘涛[1] 刘在新[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点实验室,国家口蹄疫参考实验室,甘肃兰州730046 [2]河北畜牧良种工作站,河北石家庄050061

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2009年第7期625-627,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2005CB523201)

摘　　要：目的:制备并鉴定口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3D的单克隆抗体(mAb)。方法:以纯化的原核表达3D蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞经间接ELISA法筛选,有限稀释法克隆,直至所克隆的细胞能够100%的分泌抗体,用Western blot以及间接免疫荧光法对mAbs的特异性等进行鉴定。结果:免疫的BALB/c小鼠经过多次融合筛选,共获得5株抗pET28a-3D的mAb,其亚类鉴定3株为IgG1,2株为IgG2b,初步判定所得5株mAb识别2个不同表位。Western blot显示这些mAbs与重组3D蛋白和FMDVO/China99感染的BHK-21细胞中的3D抗原均特异性结合,免疫荧光结果显示这5株mAb能够特异结合FMDV感染细胞中的3D蛋白。结论:成功获得了能识别自然3D蛋白的特异性mAb,为进一步研究3D蛋白的结构和功能以及诊断方法奠定基础。

关 键 词：口蹄疫病毒 非结构蛋白3D 单克隆抗体 原核表达 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]