小鼠sST2基因真核表达及其对LPS活化RAW264.7巨噬细胞的调节作用  

作　　者：尹辉[1,2] 龚权[2] 杨衡[2] 熊平[2] 郑芳[2] 龚非力[2] 

机构地区：[1]广东药学院微生物学与免疫学教研室,广东广州510224 [2]华中科技大学同济医学院免疫学系,湖北武汉430030

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2009年第7期654-656,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973)项目(2007CB512402);广东省医学科研基金(A2008314);广东药学院博士启动基金(2007JCX06)

摘　　要：目的:克隆并构建含小鼠sST2和人IgGFc融合基因的真核表达质粒,初步探讨其表达产物sST2-Fc融合蛋白对LPS刺激小鼠巨噬细胞生物学活性的影响。方法:借助RT-PCR技术,从小鼠脾脏总RNA中扩增全长sST2cDNA,构建sST2与hIgGFc段融合基因的真核表达载体(psST2-Fc)。应用脂质体将重组质粒psST2-Fc转染CHO细胞,经G418筛选,获得稳定表达sST2-Fc融合蛋白的CHO细胞株。细胞培养上清经蛋白A亲和层析纯化后,采用Western blot进行鉴定,应用FACS检测sST2-Fc与RAW264.7巨噬细胞表面相应受体结合情况;ELISA法检测sST2-Fc对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6的影响。结果:测序证实克隆和构建的小鼠sST2-FccDNA阅读框序列正确,Western blot证实sST2-Fc融合蛋白的表达,sST2-Fc抑制LPS诱导巨噬细胞分泌的炎性细胞因子TNF-α和IL-6。结论:成功构建sST2-Fc融合基因并获得稳定表达,sST2-Fc通过与其特异性受体结合可抑制巨噬细胞介导的炎性反应。

关 键 词：小鼠sST2-Fc 真核表达 RAW264.7 TNF-α IL-6 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]