5-Aza诱导BMSC分化为心肌细胞的分子生物学检测  

Molecular Biology Detection of 5-Aza Inducing BMSC into Cadiocyte

作　　者：龚宜超[1,2] 董雅娟[1,2,3] 柏学进[1,2,3] 封纪武 李兴芳[1,2] 刘昌菊[1,2] 

机构地区：[1]青岛农业大学动物胚胎工程中心,山东青岛266109 [2]山东省黑牛繁育工程技术研究中心,山东青岛266109 [3]山东布莱凯特牧业科技有限公司,山东淄博256306

出　　处：《中国农业科学》2009年第7期2539-2545,共7页Scientia Agricultura Sinica

基　　金：国家“863”计划重点项目(2007AA100505);山东省重大科技专项资助(2007ZHZX11101);山东省自然科学基金项目(Y2004D01)

摘　　要：【目的】利用分子生物学方法探讨5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-Aza)体外诱导牛骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)向心肌细胞的分化,为转基因良种肉牛培育提供种子细胞,提高转基因效率。【方法】利用获取的纯化稳定的P4、P8、P12代BMSC各经5、10、15μmol·L-1的5-Aza进行体外诱导分化,统计并计算心肌细胞的转化率,对诱导出现的心肌样细胞进行形态学观察和RT-PCR鉴定。【结果】诱导后细胞大多呈现梭形,排列方向渐趋一致,有肌管样结构形成。相同代数的BMSC在10μmol·L-1的5-Aza作用下诱导效果最佳;在相同浓度的5-Aza作用下,BMSC向心肌细胞的转化率随着传代次数的增加逐渐降低。RT-PCR显示诱导分化后的细胞明显表达心肌细胞的4种特异性基因,分别是α-心脏肌动蛋白(378bp)、结蛋白(601bp)、心脏肌钙蛋白T(331bp)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)(273bp)。【结论】5-Aza体外可诱导牛骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞;利用P4代BMSC在10μmol·L-1的5-Aza的作用,诱导效果明显。[Objective] This research aimed to explore 5-Aza inducing BMSC into cadiocyte utilizing molecular biology technology so as to provide seed cells for genetically modified varieties of beef cattle and elevating transgenic efficiency. [Method] Test is divided into three groups, they were the P4, P8, P12 BMSC of purification and stability. Each group utilized L-DMEM containing 5, 10, 15μmol·L^-1 5-Aza to undertake respectively derivation, statistics and calculate transformation efficiency of cadiocyte, accredit cadiocyte by observation of morphology and RT-PCR. [Result] Most ceils after differentiation showed fusiform shape, orientating with one accord, forming myotubule-like structure. The inductivity of same passage BMSC was the highest in 10μmol·L^-1 5-Aza role.The conversion rate of BMSC to cadiocyte decreased with the increasing passage number at the same concentration of 5-Aza. RT-PCR results showed that cells after induction clearly expressed cardiac four specific genes, they are a-actin （378 bp）, desmin （601 bp）, cardiac troponin T （331 bp）, β-myosin heavy chain （β-MHC） （273 bp）. [Conclusion] 5-Aza can induce bovine bone marrow mesenchymal stem ceils into cadiocyte in vitro. Effect of derivation is obvious utilizing P4 BMSC with 10 μmol·L^-1 5-Aza.

关 键 词：骨髓间充质干细胞 5-氮杂胞苷 心肌细胞 

分 类 号：S852.2[农业科学—基础兽医学]