猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH-la株N基因的分子克隆、序列测定及其比较分析  

Cloning,Sequencing and Analysis of N gene of Porcine Reproductiveand Respiratory Synrome(PRRS)Virus Strain CHla

作　　者：仇华吉[1] 童光志[1] 郭宝清 王柳[1] 张绍杰[1] 王玫[1] 于力[1] 刘宝全 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

出　　处：《中国畜禽传染病》1998年第4期217-220,共4页

摘　　要：根据已发表的ＰＲＲＳＶＩＡＦ－ｅｘｐ９１株的核酸序列，设计了一对特异性引物，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增了ＰＲＲＳＶＣＨ－ｌａ株的Ｎ基因，经补平和磷酸化后，克隆到ｐＵＣ１８ＳｍａＩ位点上。经电泳分析、酶切和ＰＣＲ鉴定证实后，进行序列测定。序列分析表明ＣＨ－ｌａ株与ＩＡＦ－ｅｘｐ９１株（美洲型）Ｎ基因核苷酸同一性为９３．２％，氨基酸同一性高达９６．７％，而与ＬＶ株（欧洲株）核苷酸同一性为６３％，氨基酸同一性仅为５９％。其推导氨基酸残基分子量为１３．３ｋＤａ。根据ＣＨ－ｌａ株Ｎ基因推导的氨基酸残基缺少欧洲型毒株ＬＶ特有的两个氨基酸片段，表明ＣＨ－１ａ株与ＩＡＦ－ｅｘｐ９１株同源性高于它与ＬＶ株的同源性，而且ＣＨ－１ａ株与鼠乳糖脱氢酶增高症病毒（ＬＤＶ）在进化关系上比ＬＶ株与ＬＤＶ更密切。ＣＨ－１ａ株Ｎ基因推导的氨基酸残基Ｎ－端１／２段约２６％是由Ａｒｇ、Ｌｙｓ和Ｈｉｓ这３种氨基酸组成的，其疏水性侧像图与ＬＶ株和ＶＲ－２３３２株（美洲型）几乎相同，这表明两种基因型的核衣壳蛋白（Ｎ蛋白）具有一定的保守性。由于Ｎ蛋白是ＰＲＲＳＶ所有结构蛋白中免疫原性比较强的病毒蛋白，是现行血清学试验的抗原基础，因此Ｎ基因的分子克隆为研制ＰＲＲ?Porcine　reproductive　and　respiratory　syndrome　virus　(PRRSV)　is　the　causative　agent　of　porcine　reproductive　and　respiratory　syndrome　(PRRS),a　newly　recognized　pig　disease　of　economic　importancePRRSV　strain　CHla　was　recently　isolated　in　a　pig　farm　in　China　during　an　outbreak　of　PRRS,and　it　was　shown　to　be　American　genotype　in　an　earlier　studyA　fragment　(encompassing　fulllength　of　N　gene)amplified　by　RTPCR　was　cloned　into　SmaI　site　of　plasmid　pUC18,and　a　recombinant　harboring　the　N　gene　was　designated　as　pUC18ORF7The　purified　recombinant　was　subjected　to　sequencingThe　N　gene　of　CHla　displayed　932%　nucleotide　identities　and　967%　amino　acid　identities　with　strain　IAFexp91(a　reference　strain　of　Canada),European　gerotype),and　only　63%　nucleotide　idetities　and　59%　amino　acid　identities　with　strain　LV(Euroqean　gerotype)The　deduced　amino　acids　of　the　N　gene　have　a　molecular　weight　of　133　kDa,and　six　hydrophobic　regions　were　identifiedThe　hydrophobicity　profiles　are　nearly　identical　between　CHla　and　LV　or　VR2332(American　genotype)The　CHla　N　protein,however,was　found　to　be　shorter　than　that　of　LV　by　five　amino　acids　The　results　indicate　that　CH1a　is　closely　related　to　IAFexp91,but　not　so　to　LV.　As　N　gene　of　PRRSV　is　relatively　conservative,the　cloned　N　gene　in　the　study　will　be　expressed　in　further　as　antigen　for　diagnostic　use,as　well　as　possible　vaccine　candidate.

关 键 词：猪病 生殖-呼吸道 综合征 PRRSV N基因 分子克隆 

分 类 号：S858.285.5[农业科学—临床兽医学]