转基因家蚕丝腺组织和转化家蚕培养细胞表达hIGF-Ⅰ  

作　　者：赵越[1] 李曦[1] 曹广力[1] 薛仁宇[1] 贡成良[1] 

机构地区：[1]苏州大学医学部,苏州215123

出　　处：《中国科学（C辑）》2009年第7期677-684,共8页Science in China(Series C)

基　　金：国家重点基础研究发展计划(批准号:2005CB121000);国家自然科学基金(批准号:30671590)资助项目

摘　　要：为实现在家蚕培养细胞和家蚕丝腺组织中表达人胰岛素样生长因子（hIGF-I）基因，以家蚕丝胶基因启动子（Pser-1）驱动hIGF-I基因，构建了带有家蚕杆状病毒ie-1启动子（Pie-1）控制的neo基因表达盒的转基因载体pigA3GFP—hIGF-ie—neo．在可表达转座酶的辅助质粒存在下，分别转染BmN培养细胞，以700～800μg/mL的G418筛选，获得了稳定转化细胞系．Westernblotting分析可检测到hIGF-I的特异性条带，ELISA检测结果显示，hIGF-I在5-100个细胞中的表达水平约7800Pg．通过反向PCR分析表明，在转化细胞中外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的靶位点序列TTAA插入细胞基因组．转基因载体pigA3GFP-hIGF—ie-neo通过精子介导法导入蚕卵，利用neo，加基因的双重筛选，经过PCR和点杂交鉴定，获得了2头转基因家蚕．ELISA检测结果显示，在G1代hIGF-I在每克中部丝腺组织中的表达水平为2440Pg左右．

关 键 词：PIGGYBAC 转化家蚕 细胞转基因家蚕 胰岛素样生长因子 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]