利用EST数据克隆大豆天冬氨酸代谢途径关键酶基因  

Cloning of Key Enzyme Genes on Aspartic Acid Metabolic Pathway in Soybean Based on EST Data

作　　者：于妍[1,2] 姜威[1,2] 唐敬仙[3] 刘春燕[1,2] 刘迎雪 陈立君 陈庆山[1,2] 胡国华[1,5] 

机构地区：[1]黑龙江省农垦科研育种中心,哈尔滨150090 [2]东北农业大学农学院,哈尔滨150030 [3]吉林农业大学发展学院,长春130600 [4]黑龙江省农科院育种所,哈尔滨150086 [5]国家大豆工程技术研究中心,哈尔滨150050

出　　处：《基因组学与应用生物学》2009年第4期651-658,共8页Genomics and Applied Biology

基　　金：国家973计划项目(2004CB117203-5);引进国际先进农业科学技术计划(2006-G1(A));国家863计划项目(2006AA100104-3);黑龙江省博士后科研启动基金(LHK-04014;LRB06-126);黑龙江省高校青年学术骨干支持计划项目(1152G007)共同资助

摘　　要：电子克隆(in silico cloning)是随着基因组计划和EST计划实施而发展起来的利用生物信息学手段进行基因克隆的新方法。本研究根据物种间同源基因相对保守的特点,利用生物信息学方法以不同物种的基因序列为信息探针,运用Blast软件与所下载的大豆EST数据库进行比对拼接,获得基因全长cDNA序列。首次克隆了大豆天冬氨酸代谢途径上AHRI、AHAS、ASADH、BCAT、CBL、DAPD、DAPE、DHDPR、DHAD、HK和TD等11个关键酶基因的cDNA序列。其中AHRI、DAPD、DAPE、DHDPR和DHAD基因经RT-PCR克隆和序列分析验证,长度分别为1764bp、1467bp、1080bp、1035bp和1806bp,结果与电子克隆序列基本一致。本实验通过与不同物种的这些基因蛋白序列比较,发现与双子叶植物拟南芥、蓖麻和马铃薯的同源性较高,而与单子叶植物水稻的同源性略低。In silico cloning was developed with the genome and EST project. It is a new method ofgene cloning by bioinformatics. According to the relative conservation of homologous genes, a exogenous gene probe of key enzyme on aspartic acid metabolic pathway were designed to the 11 full-length genes were predicted, including AHRI, AHAS, ASADH, BCAT, CBL, DAPD, DAPE, DHDPR, DHAD, HK, and TD. AHRI, DAPD, DAPE, DHDPR, and DHAD were amplified by RT-PCR, and confirmed by sequencing. The length of these five genes are 1 764 bp, 1 467 bp, 1 080 bp, 1 035 bp, and 1 806 bp. The protein similarity compared with A rabidopsis thaliana, Ricinus cornrnunis, and Solarium tuberosum were higher than that with Oryza sativa.

关 键 词：大豆 天冬氨酸 酶基因 EST数据库 

分 类 号：S565.1[农业科学—作物学] Q943.2[生物学—植物学]