团头鲂HSP70 cDNA的克隆、序列分析以及热应激对其mRNA表达的影响  

Cloning,sequence analysis of HSP70 cDNA and effects of heat stress on its mRNA expression in Megalobrama amblycephala

作　　者：明建华[1,2] 谢骏[2] 刘波[2] 何义进[2] 周群兰[2] 潘良坤[2] 俞菊华[2] 徐跑[2] 

机构地区：[1]南京农业大学无锡渔业学院,江苏无锡214081 [2]中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点开放实验室,江苏无锡214081

出　　处：《中国水产科学》2009年第5期635-648,共14页Journal of Fishery Sciences of China

基　　金：农业部行业专项(200803013);现代农业产业技术体系建设专项资金;International Foundation for Science.IFS(A/4396)

摘　　要：采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)分离、克隆出团头鲂(Megalobrama amblycephala)肝脏热休克蛋白70(HSP70)基因全长cDNA序列,共2224bp,包括135bp5′非翻译区、1932bp阅读框以及157bp3′非翻译区[不包括Poly(A)]。阅读框共编码643个氨基酸,分子量计算值为70.53kD,理论等电点为5.25。该HSP70基因在翻译区不含内含子,符合诱导型HSP70的特征。团头鲂HSP70氨基酸序列中含有HSP70家族的3个签名序列以及细胞质特异性调控基序EEVD等。同源性分析表明,团头鲂HSP70氨基酸序列与斑马鱼等脊椎动物的相似性高达84.0%以上,与无脊椎动物果蝇的相似性也高达73.4%。生物信息学分析显示,团头鲂HSP70基因所编码的蛋白质以亲水性区域为主,具有丰富的B细胞抗原位点,无信号肽,无跨膜区域,为非分泌型蛋白;同时还含有众多的蛋白激酶C磷酸化位点、N-肉豆蔻酰化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-糖基化位点,推测其可能在细胞信号转导与调控中发挥重要作用。该蛋白含有2个部分重叠的双向核定位序列,二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主,空间结构包括N端ATPase功能域和C端多肽结合功能域。应用实时定量PCR研究高温(34℃)应激对团头鲂HSP70 mRNA表达的影响。结果表明,在热应激过程中肝脏HSP70 mRNA水平呈先升高后下降的变化趋势,说明该基因的表达受热应激调控,本实验克隆的序列为诱导型HSP70 cDNA。Heat shock proteins or heat stress proteins（ HSPs） widely exist in the whole biosphere from prokaryote to mammal,which are highly conservative in evolution and very important in function. HSP70 family is one kind of the most conservative and important protein. In vivo and in vitro studies have shown that various stressors transiently increase production of HSP70s as protection against harmful insults. In this research,RT-PCR and RACE（ Rapid amplification of cDNA ends） methods were used for the cloning of fu...

关 键 词：团头鲂 HSP70 热应激 克隆 表达 实时定量PCR 

分 类 号：S917[农业科学—水产科学]