5HRE联合P_(CEA)调节TSST-1/CD80TM重组基因表达的逆转录病毒载体的构建  

作　　者：孙学军[1] 卢乐[1,2] 禄韶英[1] 周培华[1] 王炜[1] 

机构地区：[1]西安交通大学医学院第一附属医院普外科,陕西西安710061 [2]西安交通大学医学院第二附属医院普外科,陕西西安710004

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2009年第10期863-865,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30672070;30400430)

摘　　要：目的:构建5个拷贝的缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(PCEA)联合调控超抗原-中毒性休克综合症基因(TSST-1)与CD80分子跨膜序列(CD80TM)融合基因的逆转录病毒表达载体。方法:设计引物应用PCR法分别从人直肠癌基因组克隆PCEA,从野生株金黄色葡萄球菌基因组克隆TSST-1全长基因。利用重叠PCR法从pCMV-SPOR-T6-CD80载体克隆融合有中性linker的CD80TM基因片段。选择pLEGFP-N1为原始逆转录病毒表达载体,选取合适的酶切位点SphⅠ和BglⅡ,联合双酶切和PCR方法去除原始载体中巨细胞病毒即刻早期启动子(PCMVIE)。将上述基因片段与去除了PCMVIE的pLEGFP-N1重组,构建携带5HRE、PCEA、TSST-1、linker-CD80TM基因的逆转录病毒表达载体。结果:成功克隆PCEA和TSST-1基因。构建了融合中性linker的CD80TM,测序与预期相符。将上述片段重组到载体pLEGFP-N1上,酶切鉴定和DNA序列分析无误。结论:成功构建了逆转录病毒表达载体pLEFGP-N1-5HRE-PCEA-TSST-1-linker-CD80TM,为下一步的体外实验奠定了基础。

关 键 词：缺氧反应元件 癌胚抗原 超抗原 CEA-阳性肿瘤 免疫基因治疗 

分 类 号：R656.9[医药卫生—外科学]