含有人H5N1流感病毒NA基因的重组腺病毒候选疫苗株在小鼠体内诱发细胞免疫反应  

Two Recombinant Adenovirus Vaccine Candidates Containing Neuraminidase Gene of H5N1 Influenza Virus(A/Anhui/1/2005)Elicited Effective Cell-Mediated Immunity in Mice

作　　者：马晶[1] 张晓光[2] 陈红[3] 李魁彪[3] 张晓梅[2] 张柯[3] 杨亮[2] 徐红[3] 舒跃龙[3] 谭文杰[3] 曾毅[1,2] 

机构地区：[1]北京工业大学生命科学与生物工程学院,北京100022 [2]中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室,北京100052 [3]中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室,北京100052

出　　处：《病毒学报》2009年第5期327-332,共6页Chinese Journal of Virology

基　　金："十一五"国家科技支撑计划项目(编号:2006BAD06A15);国家重点研究发展计划(973)项目(编号:2005CB523000);国家自然科学基金重大项目(编号:30599433)资助

摘　　要：本研究旨在构建人H5N1流感病毒NA基因的重组腺病毒候选疫苗株,并考察其在BALB/c小鼠体内的细胞免疫效果。本研究选用流感病毒A/Anhui/1/2005(H5N1)的NA基因为研究对象,分别将野生型和按照人密码子优化的NA基因插入重组腺病毒载体,构建并鉴定了两种重组腺病毒rAdV-WtNA和rAdV-Mod.NA,纯化后病毒在第0周和第4周以肌肉注射方式免疫BALB/c小鼠两次,免疫剂量是109TCID50/只/次,第5周时使用Elispot方法检测并比较病毒的细胞免疫效果。结果显示,所制备和纯化的两种重组病毒均可有效表达NA目的蛋白;免疫后的小鼠均可检测出明显的针对NA抗原的特异性细胞免疫反应,而且rAdV-Mod.NA组分泌IFN-γ细胞的数量显著高于rAdV-WtNA组(P=0.016)。说明rAdV-Mod.NA是较好的人H5N1流感病毒候选疫苗株,值得进一步深入研究。The aim of this study is to develop the recombinant adenovirus vaccine （rAdV） candidates containing neuraminidase （NA） gene of H5N1 influenza virus and test in BALB/c mice the effect of cell-mediated immunity. In this study, two kind of NA gene （WtNA gene, the wild type; Mod. NA gene, the codonmodified type） derived from H5N1 influenza virus（A/Anhui/1/2005）were cloned and inserted respectively into plasmid of adenovirus vector, then the rAdV vaccines candidates （rAdV-WtNA and rAdV-Mod. NA） were developed and purified, followed by immunization intramuscularly （10^9 TCIDs0 per dose, double injection at 0 and 4tb week） in BALB/c mice, the effect of cell-mediated immunity were analysed at 5th week. Results indicated that： （i） NA protein expression was detected in two rAdV vaccines candidates by Western blotting; （ii） the rAdV-Mod. NA vaccine could elicit more robust NA specific cell-mediated immunity in mice than that of rAdV-WtNA vaccine （P=0. 016） by IFN-7 ELIspot assay. These findings suggested rAdV-Mod. NA vaccine was a potential vaccine candidate against HSN1 influenza and worthy of further investigation.

关 键 词：H5N1 神经氨酸酶 重组腺病毒 细胞免疫 

分 类 号：R373.1[医药卫生—病原生物学] Q78[医药卫生—基础医学]