PRRSV GP5蛋白在重组牛痘病毒中的表达与鉴定  

Expression of PRRSV GP5 in recombinant vaccinia virus

作　　者：田野[1,2] 张维军[1] 林燕[1] 王群[1] 杨涛[1] 步志高[1] 童光志[3] 张守发[2] 吴东来[1] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001 [2]延边大学农学院,吉林龙井133400 [3]中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241

出　　处：《中国预防兽医学报》2009年第11期833-837,共5页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：国家863计划(2006AA10A203);黑龙江省自然科学基金重点项目(ZJN-0602-01)

摘　　要：为构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5重组牛痘病毒,本研究通过RT-PCR获得PRRSVCH-1a株GP5蛋白基因,将其克隆至pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,将该片段作为目的基因亚克隆至转移质粒pSC11中,构建重组转移质粒(pSC11-GP5)。将pSC11-GP5转染WR株牛痘病毒感染的TK-143细胞,与牛痘病毒进行同源重组。在含有X-gal的琼脂培养基上进行蓝斑筛选,获得了含有PRRSV GP5基因的重组病毒(rWR-PRRSV-GP5)。IFA及动物试验表明,重组病毒表达了PRRSVGP5蛋白,并在免疫小鼠体内诱生了较强的PRRSV抗体。实验表明,该重组病毒所表达的PRRSV GP5蛋白保持了良好的抗原性,为进一步研究PRRSV GP5蛋白免疫原性提供了基础数据,也为PRRS重组活载体疫苗的研究奠定了基础。The GP5 gene of porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV） CH-la strain was amplified from the PRRSV genome by RT-PCR, and cloned into the transfer plasmid pSC11 to produce pSC11-GP5. Recombinant vaccinia virus containing the GP5 gene （rWR-PRRSV-GP5） was generated through homologous recombination between pSC11-GP5 and vaccinia virus WR strain in TK-143 cells, purified by plaque assay and identified by PCR. Expression of the GP5 protein was detected by SDS-PAGE. Antigenicity of the recombinant GP5 protein was confirmed by indirect immunofluorescence assay （IFA）. Inoculation to mice with rWR-PRRSV-GP5 induced specific humoral immune responses against PRRSV.

关 键 词：猪生殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 重组牛痘病毒 

分 类 号：S852.65[农业科学—基础兽医学]