miR-21真核表达载体的构建及其活性鉴定  

作　　者：赵健[1] 闫康[1] 高杰[1] 赵广义[1] 杨彤涛[1] 范清宇[1] 马保安[1] 

机构地区：[1]第四军医大学唐都医院全军骨科中心,陕西西安710038

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2009年第11期1047-1049,1052,共4页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30672143)

摘　　要：目的:构建miR-21的真核表达载体,并使其在骨肉瘤MG63细胞中表达,为研究miR-21对骨肉瘤细胞MG63的作用打下基础。方法:根据miRNA的成熟序列以及附近约200多碱基共433个碱基序列,设计PCR引物,PCR扩增,退火后用T4连接到线性化的pcDNA3.1(+)质粒中,并对重组质粒进行双酶切、菌落PCR及测序分析,鉴定完全正确的重组质粒转染骨肉瘤细胞MG63,G418(400 mg/L)筛选4周获得miR-21稳定表达细胞系,用Northern blot及real time RT-RCR法鉴定pcDNA3.1(+)-miR-21可在真核细胞中过表达。结果:成功构建了miR-21的真核表达载体,并获得稳定转染重组质粒的细胞系。结论:miR-21的真核表达载体在骨肉瘤细胞MG63中稳定高表达,为进一步研究miR-21在骨肉瘤MG63中的功能及基因调控机制奠定了实验基础。

关 键 词：PCDNA3.1(+) 真核表达载体 miRNA MIR-21 转染 

分 类 号：R392-33[医药卫生—免疫学]