酵母展示筛选scFv方法的建立  

作　　者：尹成凯[1] 徐黎明[1] 任桂萍[1] 张巧[1] 刘向宇[1] 田辉[1] 李德山[1] 

机构地区：[1]东北农业大学生命科学学院生物制药实验室,黑龙江哈尔滨150030

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2009年第12期1204-1206,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：哈尔滨市科技创新人才发展计划资助(2006RFXXS002);东北农业大学创新团队发展计划资助;黑龙江省教育厅项目(11521022);哈尔滨市科技创新人才研究专项资金(2008RFQXS017)

摘　　要：目的:利用酵母展示技术建立筛选scFvs的技术平台,为今后从抗体库中筛选高亲和力抗体奠定基础。方法:改造pYD1载体,将其自身所带的GSLinker上下游两端突变出酶切位点,构建成pYD-x;分别将IL-1β抗体的重链与轻链可变区片段插入pYD-x中GSLinker的上下游,构建出重组质粒pYSD1。从pYSD1上PCR扩增出scFv片段,并将其插入pYD1的MCS区,构建出重组质粒pYSD2。将pYSD1与pYSD2分别转入酿酒酵母EBY100中诱导表达scFv,并用流式细胞术(FCM)检测抗体展示情况。结果:经诱导后,从流式细胞仪检测结果中可以看出EBY100-pYSD1所展示的scFv与抗原结合力很弱,而EBY100-pYSD2则表现出一定强度的结合。结论:本实验证明了pYD-x载体上存在的额外的GSLinker对于抗体展示的必要性,并且成功建立了利用酵母展示载体pYD1进行scFvs筛选的技术平台。

关 键 词：酵母展示 pYD1 SCFV GS LINKER 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]