狭边大叶藓(Rhodobryum ontariense)ISSR-PCR反应体系的建立与优化  

Optimization of ISSR-PCR Reaction System in a Rare Medicinal Plant Rhodobryum ontariense(Bryaceae)

作　　者：汪琛颖[1,2] 赵建成[1] 

机构地区：[1]河北师范大学生命科学学院,石家庄050016 [2]郑州师范高等专科学校生命科学系,郑州450044

出　　处：《武汉植物学研究》2009年第6期679-683,共5页Journal of Wuhan Botanical Research

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30670152);河北省自然科学基金(C2008000158)资助;"十一五"国家科技基础条件平台建设专项(2005DKA21403)部分支持

摘　　要：研究目的是获得适用于狭边大叶藓（Rhodobryum ontariense）遗传多样性研究的ISSR—PCR反应标准化程序。通过单因素试验设计，对Mg^2＋、dNTPs、Taq DNA聚合酶、模板、引物浓度，以及退火温度、循环次数等影响ISSR扩增的主要因素进行了研究和优化。结果表明，UBC808、UBC811、UBC812、UBC825、UBC826、UBC841、UBC888及UBC891引物适用于该研究；20μL ISSR—PCR最适反应体系包括：6ngDNA模板、0．4μmol／L引物、2．25mmoL／LMg^2＋、0．6U Taq DNA聚合酶、0．4mmol／LdNTPs。扩增程序为：94℃预变性4min；然后94℃变性1min，48～50℃（根据不同引物确定）复性2min，72℃延伸1min，共进行40个循环；最后，72℃延伸7min，4℃保存。To seek a standardizing program of ISSR technique for the genetic diversity analysis of a rare medicinal plant Rhodobryum ontariense, a single-factor experiment was designed to optimize ISSR-PCR amplification system. A suitable ISSR reaction system was obtained,that is ：20 μL reaction system containing 6 ng DNA template,0.4 μmol/L primer,2.25 mmol/L Mg^2＋ ,0.6 U Taq DNA polymerase,0.4 mmol/L dNTPs. The profile of ISSR amplification was 4 rain at 94℃ , followed by 40 cyeles of denaturation for 1 min at 94℃ ,annealing for 1 min at 48 -50℃ （according to specifie primer） ,and extension for 1 min at 72℃ ,and ending with a final extension for 7 min at 72℃ ,stored at 4℃.

关 键 词：狭边大叶藓 ISSR 反应体系 优化 遗传多样性 

分 类 号：Q943.6[生物学—植物学]