人细胞核诱导凋亡因子1在大肠杆菌中的表达、纯化及多克隆抗体制备  

作　　者：罗清[1] 赵玫[1] 时岚[1] 马怡茗[1] 钟佳玲[1] 黄常志[1] 

机构地区：[1]中国医学科学院/北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所病因室分子肿瘤学国家重点实验室癌发生及预防分子机理北京市重点实验室,北京100021

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2010年第1期56-58,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家重大科学研究资助项目(2007CB914700)

摘　　要：目的:构建人核凋亡诱导因子1(NAIF1)原核表达质粒,在大肠杆菌中表达及纯化NAIF1融合蛋白,制备兔抗NAIF1多克隆抗体,并对其特性进行初步鉴定。方法:PCR法获得人NAIF1序列并将其克隆到原核表达载体pET-32a中,重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达蛋白,经变性、Ni+柱亲和纯化、复性后得到纯化的重组人NAIF1蛋白,免疫大耳白兔,制备兔抗人NAIF1多抗血清,以ELISA和Westernblot方法检测其效价和特异性。结果:成功获得了高纯度的人NAIF1重组蛋白和高效价的兔抗人NAIF1多抗血清,ELISA检测多抗效价达到1∶500000,Westernblot检测证明多抗特异性良好。结论:获得了高纯度的人NAIF1重组蛋白和兔抗人NAIF1多抗血清,为后续针对NAIF1基因功能的研究提供了重要实验材料。

关 键 词：NAIF1 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 

分 类 号：R392-33[医药卫生—免疫学] R392.11[医药卫生—基础医学]