Ana-1巨噬细胞分泌exosomes的提取及免疫鉴定  

作　　者：王桂花[1] 周向梅[1] 尹晓敏[1] 杨利锋[1] 周海云[1] 张交儿[1,2] 刘爱林[3] 赵德明[1] 

机构地区：[1]中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室,北京100193 [2]沈阳农业大学动物医学院,辽宁沈阳110161 [3]邯郸市动物疫病预防控制中心,河北邯郸056005

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2010年第1期84-85,88,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家科技部星火计划资助(2006EA125015);国家科技支撑计划资助(2008BAI54B06)

摘　　要：目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exo-somes。方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exosomes。样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70mAb和calnexin多克隆抗体,通过免疫印迹法和免疫金标记法进行免疫鉴定。结果:电镜下可以观察到提取的exosomes平均大小为50～100nm。免疫印迹法分析结果显示,提取的exosomes表达Flotillin、Tsg101和Hsp70蛋白,相对分子质量(Mr)分别为45000、43000和70000,但不表达calnexin蛋白;免疫电镜分析显示ex-osomes膜表面和内部有明显的金颗粒。结论:Ana-1巨噬细胞分泌exosomes。

关 键 词：Ana-1巨噬细胞 小囊泡 免疫胶体金 免疫印迹 

分 类 号：S852[农业科学—基础兽医学]