siRNA沉默CTGF表达对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响  

作　　者：汤珣[1] 蔡德鸿[2] 曾莉[3] 章俊[1] 

机构地区：[1]南方医科大学珠江医院肾内科,广州510282 [2]南方医科大学珠江医院内分泌科,广州510282 [3]南方医科大学公共卫生与热带医学学院,广州510515

出　　处：《广东医学》2010年第1期55-58,共4页Guangdong Medical Journal

基　　金：广东省自然科学基金资助项目(编号:200332842);广东省科技计划项目(编号:2007B031503001;2009B030801221)

摘　　要：目的探讨针对结缔组织生长因子(CTGF)基因的siRNA对高糖条件培养下的人肾小管上皮细胞株HK-2细胞向间充质细胞转分化(EMT)的影响。方法将体外培养的HK-2细胞分为6组:(1)正常对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L;(2)等渗对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L,甘露醇3.5 g/L;(3)高糖组,培养基含D-葡萄糖4.5 g/L;(4)高糖+空白对照组:细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养;(6)高糖+干扰组:细胞转染针对CTGF的siR-NA表达质粒后于高糖培养基中培养。应用RT-PCR检测CTGF mRNA水平,Western blot法检测CTGF、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白水平。结果高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGFmRNA及蛋白水平,并呈时间依赖性降低HK-2细胞的E-cadherin蛋白表达水平,升高α-SMA蛋白表达水平。而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低,同时伴有细胞E-cadherin蛋白表达升高,α-SMA蛋白表达水平降低。结论CTGF是高糖诱导HK-2细胞EMT的重要介质。针对CTGF的siRNA能明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT,为进一步寻找DN防治的靶点提供了新的实验依据。

关 键 词：结缔组织生长因子 小分子干扰RNA 糖尿病肾病 肾小管上皮细胞 转分化 

分 类 号：R692.33[医药卫生—泌尿科学] R394[医药卫生—外科学]