人FcγRⅠ受体胞外区基因的克隆、原核表达及纯化  

作　　者：苗现伟[1,2] 刘玺[3] 张改平[2] 席俊[2] 张利娜[2] 刘运超[2] 游雷鸣[2] 赵玉军 

机构地区：[1]河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002 [2]河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002 [3]河南科技学院,河南新乡453003 [4]开封市畜产品质量监测检验中心,河南开封475000

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2010年第2期178-180,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金重点资助项目(30730068);国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2005CB523200)

摘　　要：目的:探讨人FcγRⅠ(huFcγRⅠ)胞外区蛋白的原核表达纯化及其在体外与IgG的结合活性。方法:PCR方法从人的外周血白细胞中扩增出huFcγRⅠORF区全长基因并与T载体链接,从克隆载体huFcγRⅠ-T中扩增huFcγRⅠ胞外区基因,并将其装入原核表达载体pGEX-6p-1。构建好的载体转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导重组蛋白表达,并利用SDS-PAGE和Western blot对表达的蛋白进行鉴定。结果:扩增到了huFcγRⅠ的胞外区基因,所构建的pGEXhuFcγRⅠ重组质粒经PCR和酶切鉴定与预期一致。IPTG诱导下目的蛋白的表达率约为30%。SDS-PAGE结果显示表达的目的相对分子质量(Mr)56 700与理论预期值一致。West-ern blot结果显示原核表达的huFcγRⅠ胞外区蛋白与人IgG特异亲和。结论:FcγRⅠ(huFcγRⅠ)胞外区蛋白在原核表达系统中得到有效的表达,复性蛋白在体外与人的IgG特异结合。

关 键 词：FcγRⅠ重组蛋白 原核表达 纯化 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]