双亚型(H5/H7)流感病毒血凝素基因真核表达质粒的构建及其在BHK细胞中的表达  

作　　者：白靓[1] 金宁一[2] 成岩[1] 石毅[1] 王芳[1] 鲁会军[2] 南文龙[2] 关铭[1] 

机构地区：[1]吉林大学药学院,吉林长春130021 [2]军事医学科学院11所全军基因工程重点实验室

出　　处：《中国老年学杂志》2010年第3期374-376,共3页Chinese Journal of Gerontology

摘　　要：目的构建双亚型(H5/H7)流感病毒血凝素真核表达载体,并在幼仓鼠(BHK)细胞中进行表达。方法通过PCR方法分别改造流感病毒H5亚型血凝素(HA)和H7亚型HA基因片段,在融合片段间引入具有柔性功能的(G4S)3linker和具有自裂解功能的口蹄疫蛋白2A linker。将融合后的基因片段H5HA-H7HA克隆至真核表达载体pVAX1。选用BHK真核表达细胞系,用脂质体转染法将纯化后的表达质粒在细胞进行表达,转染后48h,用间接免疫荧光法(IFA)检测目的基因的表达情况。结果表达双亚型(H5/H7)流感病毒血凝素基因的重组真核表达质粒pVAX1-H5HA-H7HA经酶切和测序证明构建正确。转染重组质粒的BHK细胞可检测到目的蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pVAX1-H5HA-H7HA,并在BHK真核细胞中正确表达,为H5、H7双亚型核酸疫苗的研究奠定了基础。

关 键 词：流感病毒 血凝素 真核表达 BHK细胞 

分 类 号：Q81[生物学—生物工程]