ROCK-Ⅱ基因shRNA质粒表达载体的构建与鉴定  

作　　者：李晓江[1] 白云深[1] 杨有庚[1] 

机构地区：[1]吉林大学第二医院骨科,吉林长春130041

出　　处：《中国老年学杂志》2010年第4期502-504,共3页Chinese Journal of Gerontology

摘　　要：目的构建表达Rho激酶(ROCK)-Ⅱ特异性siRNA的重组质粒。方法按照Elbashir等设计原则和siRNA表达载体的要求,利用Ambion公司在线siRNATatgetfinder软件,设计带有BamHI、BbsI酶切黏性末端、终止识别序列和LOOP环的shRNA,并将其克隆入载体pGPU6/GFP/Neo,构建成ROCK-Ⅱ特异siRNA重组质粒,然后进行酶切鉴定及基因测序。结果设计的shRNA成功克隆入载体pGPU6/GFP/Neo,构建成ROCK-Ⅱ特异siRNA重组质粒,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误。结论重组质粒构建成功,为今后体外或体内研究ROCK基因在脊髓损伤后的功能修复提供了一种有效的方法。

关 键 词：载体构建 RNA干扰 ROCK(Rho激酶) 

分 类 号：Q782[生物学—分子生物学]