铜鱼ISSR-PCR反应体系的正交设计优化  

Optimization of the ISSR-PCR System on Coreius heterodon(Bleeker) by Orthogonal Design

作　　者：孔焰[1] 张昊星[1] 谢小军[1] 

机构地区：[1]西南大学生命科学学院,重庆400715

出　　处：《西南大学学报（自然科学版）》2010年第2期56-61,共6页Journal of Southwest University(Natural Science Edition)

基　　金：重庆市自然科学基金资助项目(CSTC2007BA7029)

摘　　要：采用正交设计方法,对影响铜鱼(Coreius heterodon(Bleeker))ISSR-PCR扩增结果的5个因素,如Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶和模板DNA的浓度,在4个水平上进行了比较优化,建立了适合铜鱼的最佳ISSR-PCR反应体系:在25μL反应体系中含有1.5 mmol/L Mg2+,0.16 mmol/L dNTP,0.2μmol/L引物,1UTaqDNA聚合酶和140 ng模板DNA.检验结果表明,采用该反应体系对铜鱼进行ISSR-PCR扩增可获得多态性高,稳定性和重复性好的电泳条带.The method of orthogonal design was used to optimize five factors,i.e.concentration of Mg2＋,dNTP,primer,Taq DNA polymerase and DNA temple,which affect ISSR-PCR amplification results of Coreius heterodon（Bleeker）,each at four levels,and an optimal ISSR-PCR reaction system for C.heterodon（Bleeker） was established： an ISSR-PCR reaction system with a total volume of 25 μL containing 1.5 mmol/L Mg2＋,0.16 mmol/L dNTP,0.2 μmol/L primer,1U Taq DNA polymerase and 140 ng DNA temple.The testing results of the reaction system confirmed that it can produce stable and reproducible electrophoretic bands with high polymorphism of ISSR-PCR for C.heterodon（Bleeker）.

关 键 词：铜鱼 ISSR-PCR 正交设计 优化 

分 类 号：Q173[生物学—水生生物学]