毛薯ISSR-PCR反应体系的建立  

Establishment of ISSR-PCR System in Dioscorea esculenta (lour) Brukill

作　　者：罗欣[1] 周鑫[1] 程文杰[1] 黄小龙[1] 黄东益[1] 

机构地区：[1]海南大学农学院,海南儋州571737

出　　处：《基因组学与应用生物学》2010年第1期174-178,共5页Genomics and Applied Biology

基　　金：海南省重点学科建设专项(xkxm0811-03);高等学校博士学科点专项科研基金(200805650004)共同资助

摘　　要：本研究主要建立毛薯ISSR-PCR的最佳反应体系。研究采用改良CTAB法提取毛薯总基因组DNA,应用单因子实验法设定模板DNA,Mg2+浓度,dNTP浓度,Tap酶浓度以及退火温度的5个不同梯度,探讨单因素变化对毛薯ISSR-PCR扩增的影响。实验结果表明,毛薯ISSR-PCR最佳反应体系为:总体积20μL,模板DNA为50ng、Taq酶为0.8U、Mg2+浓度为2.0mmol/L、引物浓度为0.5μmol/L、dNTPs浓度为0.5mmol/L。In this study,we have established and optimized ISSR-PCR system of D. esculenta,and we used modified CTAB method to extract its genomic DNA,then setting 5 different gradient by single factor experiment with template DNA,Mg2＋ concentration,dNTP concentration,template concentration and annealing temperature,in order to investigate the effect of single-factor change on ISSR-PCR amplification of D. esculenta. The experimental result showed that the optimized ISSR reaction system of D. esculenta was as below,50 ng template DNA,0.8 U Taq DNA polymerse,2.0 mmol/L Mg2＋,0.5 μmol/L primer and 0.5 mmol/L dNTPs with a total 20 μL reaction solution.

关 键 词：毛薯 ISSR-PCR 反应体系 

分 类 号：S632.9[农业科学—蔬菜学]