花生磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的克隆及反义表达载体的构建  

CLONING OF PEANUT GENE FRAGMENT ENCODING PEPCASE AND CONSTRUCION OF LTS PLANT EXPRESSION VECTOR

作　　者：潘昱名[1] 刘风珍[1,2] 万勇善[1,2] 郑成超[2] 

机构地区：[1]山东农业大学农学院 [2]作物生物学国家重点实验室,山东泰安271018

出　　处：《山东农业大学学报（自然科学版）》2010年第1期1-5,共5页Journal of Shandong Agricultural University：Natural Science Edition

基　　金：国家863计划项目(2006AA10A115);山东省中青年科学家科研奖励基金项目(2006BSB01049);山东省农业良种工程项目(鲁科农社字〔2007〕217号);山东博士后创新项目(200703034)

摘　　要：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)是控制植物籽粒中蛋白质/油脂含量比例的关键酶。本研究利用RT-PCR技术,克隆PEPCase基因的cDNA片段,并将克隆的PEPCase基因片段反向连接替代植物表达载体PB I121的GUS基因。从花生栽培品种荔蒲大花生中克隆获得编码PEPCase基因的cDNA片段(886 bp),测序结果显示其核苷酸序列与已报道的花生(EU391629)、棉花(AY008939)、大豆(D10717)、拟南芥(AY210895)、豌豆(D64037)PEPCase基因对应部分的同源性分别为99.77%、84.37%、81.54%、81.25%、78.71%。构建的反义表达载体中PEPCase基因由35S启动子所控制,将构建的反义表达载体命名为pBGPEP。为通过反义抑制技术提高花生含油量提供了基因及表达载体。Phosphoenolpyruvate carboxylase（PEPCase） plays an important role in the control of the ratio of the protein / lipid content in plant seed.A 886 bp DNA fragment was amplified by RT-PCR using PEPCase gene special primer from peanut seed.The DNA sequence analysis indicated that the sequence of this fragment was shared 99.77%、84.37%、81.54%、81.25%、78.71% homology with the corresponding sequence of the reported PEPCase gene in peanut、cotton、soybean、arabidopsis thaliana、pea.The 886 bp fragment digested by BamH I and SacI and ligated into the GUS site of the pBI121 in the antisense orientation and constructed the antisence expression vector pBGPEP.

关 键 词：花生 PEP羧化酶 RT-PCR 反义表达载体 

分 类 号：S718.3[农业科学—林学]