衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的克隆、表达及纯化  

作　　者：王飞[1] 朱庆三[2] 苗旭漫[1] 胡宁宁[3] 李霄[3] 金宁一[3] 

机构地区：[1]中国人民解放军第208医院 [2]吉林大学中日联谊医院,吉林长春130033 [3]军事医学科学院军事兽医研究所基因工程重点实验室

出　　处：《中国老年学杂志》2010年第5期635-638,共4页Chinese Journal of Gerontology

摘　　要：目的构建含衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的原核表达载体,经转化E.coli以表达CPAF融合蛋白,研究其生物学功能。方法从病料中克隆得到CPAF的原始基因,将PCR产物经纯化连接到pMD18-T,将重组质粒pMD-CPAF经NdeI和BamHI双酶切,与用相同酶消化的原核表达载体pET42b(+)连接,建立pET42b(+)-CPAF表达载体,阳性克隆经鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,经亲和纯化、离子交换纯化、分子筛纯化融合蛋白,进行SDS-PAGE分析,Western印迹检测。结果经酶切鉴定和测序分析证实原核表达质粒构建正确。SDS-PAGE和West-ern印迹结果显示在70kD处呈现单一蛋白条带,pET42b(+)-CPAF重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达了CPAF天然蛋白,目的蛋白占全菌体蛋白的20%左右,采用镍柱的亲和纯化后,可达70%左右。结论经DNA测序、SDS-PAGE、Western印迹检测表明成功构建了能够稳定表达可溶性CPAF的菌株,并获得纯化CPAF的方法,为今后CPAF的研究及应用奠定了基础。

关 键 词：衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF) 表达 纯化 生物学功能 

分 类 号：R392.11[医药卫生—免疫学]