小鼠胚胎干细胞中MT-Ⅱ基因的定位改变  

Targeting of MT-Ⅱ Gene in Mouse ES Cells

作　　者：张新涛[1] 于冬梅 吴鹤龄[1] 

机构地区：[1]北京大学生命科学学院,北京100871

出　　处：《Acta Genetica Sinica》1998年第6期491-498,共8页

基　　金：国家自然科学基金!39370376

摘　　要：构建了小鼠MT－Ⅱ基因的定位整合载体pMT－Ⅱ6.7，这是一个置换型载体，它包含了6．7kb的与MT－Ⅱ基因及其旁侧序列同源的序列。用电穿孔方法将这一载体转化入小鼠ES细胞Mespu22中，在G418R、GancR的双抗性克隆中，用PCR方法进行筛选，从104个克隆中获得26个阳性克隆；对这26个克隆进行核型分析表明，其中有2个克隆，即克隆5－2和8-4的核型（2n=40，XY）正常率很高，达到84％和88％；进一步用Southern杂交分析，结果证明，在MT－Ⅱ基因位点确实发生了定位整合事件。利用这两个克隆的细胞进行体内、体外分化实验表明，它们具有体内、体外分化能力，进一步进行了嵌合体的制作，现已获得用克隆8-4细胞制作的嵌合体小鼠。A MT-Ⅱ gene targeting vector-pMT-Ⅱ6.7 with 6.7kb sequences homolog tomMT-Ⅱ and its flanking region has been transfected into Mespu22 with electroporation.We have got 26 positive clones from 104 G418R and GancR clones with PCR method.From the karyotype analysis, we found tWo clones with 84% and 88% normalkaryotype. They are clone 5-2 and 8-4. Using Southern analysis, we confirm that thetwo clones are homologous recombinants. These cell lines still have the pluropotentialability to differentiate both in vitro and in vivo. Now we have got a chimera mousewith cells from clone 8-4.

关 键 词：定位整合 MT-Ⅱ基因 胚胎干细胞 

分 类 号：Q754[生物学—分子生物学] Q523.03